话梅、鸡腿及火腿中人工合成着色剂的检测 SPE-HPLC法-ProElut PWA-2+Inspire C18

样品前处理：

1、标准品配制

(1) 单标储备液1000 ug/mL，称取适量色素单标，用10%甲醇水配制成1000 ug/mL的单标储备液。

(2) 混标中间液100.0 ug/mL，吸取适量储备液单标1000 ug/mL，用10%甲醇水配制成100 ug/mL的混标中间液。

2、提取

2.1 话梅

(1) 取1.0 g话梅，加入5 mL提取液A*，于70℃水浴超声振荡10 min使其分散，再加15 mL提取液A振荡2 min，70℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；

(2) 取下层残留物，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，70℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；

(3) 再向下层残留物，加入20 mL提取液A*按(2)重复提取一次，合并三次上清液；

(4) 在35℃水浴条件下，减压蒸至约18 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。

2.2 鸡腿、火腿（肉肠）

(1) 1.0 g样品，加入1 g C18，加入20 mL提取液A*，振荡2 min，60℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；

(2) 取下层残留物，加入10 mL提取液A*，振荡2 min，60℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；

(3) 再向下层残留物中，加入10 mL提取液A*按(2)重复提取一次，合并三次上清液；

(4)在35℃水浴条件下，减压蒸至约12 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。

*提取液A：取100 mL乙醇和50 mL乙腈，混匀，取140 mL乙醇：乙腈（2：1）混合溶液，加入60 mL水和2 mL氨水，混匀。

3、净化

ProElut PWA-2 150 mg/6 mL（Cat.#65815）

(1)活化：	依次用5 mL甲醇、5 mL10%甲酸水，流出液弃去；
(2)上样：	将上样液加入柱中，流出液弃去；
(3)淋洗：	依次用5mL水、5 mL甲醇淋洗，流出液弃去；
(4)洗脱：	6 mL15%氨水甲醇洗脱，收集洗脱液；
(5)定容：	将洗脱液在50 ℃下氮吹至约300 uL，用流动相定容至1 mL，上机分析。

色谱条件：

色谱柱：Inspire C18，250 mm×4.6 mm，5μm（Cat# 81006）

流速：1.0 mL/min 进样量：20 μL 柱温：35 ℃

检测器：PDA 254 nm

流动相：A：乙腈 B：0.02 mol/L 乙酸铵溶液

梯度设置

摘要：: 《GB 2760-2014 食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定在蜜饯和肉制品中准许使用的人工合成色素有严格规定。很多蜜饯和肉制品生产厂家为了颜色鲜艳，添加部分合成色素，蜜饯和肉制品类样品基质复杂，色素提取净化过程麻烦，因此建立蜜饯和肉制品中简便、快速的合成色素多组分检测方法非常有必要。

迪马科技开发的《话梅、鸡腿及肉肠中人工合成着色剂的检测》，采用乙醇、乙腈和水提取、ProElut PWA-2固相萃取柱净化，HPLC-PDA检测。对比国标方法《GB 5009.35-2016 食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》，本方案具有提取方法简单、回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点；方法检出限：亮蓝是1.0 mg /kg，其他的着色剂是0.2 mg /kg，与国标一致。

图谱：

注：

*回收率：个别有干扰的目标峰用Zda吸收波长积分。

*柠檬黄：话梅类样品做柠檬黄时，回收率重现性不好。