VEB-3型与VEB-1型超广谱-内酰胺酶生化特性的比较

摘要 目的 研究VEB-3型超广谱-内酰胺酶（ESBL）的生化特性，并与VEB-1型ESBL进行比较方法 将blaVEB-3和blaVEB-1基因连接至pET28a载体上，并用重组质粒转化大肠埃希菌BL21进行克隆表达，分别挑选blaVEB-3或blaVEB-1阳性表达的菌落测定-内酰胺类抗生素对其ZdiYJ浓度（MIC），同时提取酶蛋白进行等电点和酶动力学分析 结果 VEB-3和VEB-1型ESBL具有基本一致MIC和相同的等电点（pI 7.45），但两者的酶动力学性质存在一定的差异：对头孢他啶和头孢噻肟，VEB-3较VEB-1表现出更高的亲和力，两者Km相差一倍左右；对头孢噻吩，VEB-1比VEB-3更具亲和力；而对阿莫西林，VEB-1型ESBL表现出很高的亲和力，而VEB-3仅有低的亲和力，两者Km相差20多倍 结论 VEB-3和VEB-1型ESBL具有相同的等电点，不同的动力学参数，blaVEB-1基因中Leu56 Phe突变可能导致了两者酶动力学性质的差异
关键词 -内酰胺酶 等电点 酶动力学 紫外-可见分光光度计