细胞传代培养

细胞传代培养

一原理
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶
二材料和试剂
1细胞：贴壁细胞株
2试剂：0.25％胰酶1640培养基（含10％小牛血清）
3仪器和器材：倒置显微镜，培养箱培养瓶吸管废液缸等
三操作步骤
1将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去
2加入0.51ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中
3瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10ml培养液终止消化
观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化一般室温消化时间约为13分钟
4用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37下继续培养第二天观察贴壁生长情况