适用于膜片钳系统的细胞培养小妙招

       细胞状态的好坏对实验结果有着直接影响，而这一点对于膜片钳实验显得尤为突出。膜片钳实验在封接、破膜过程中，对细胞膜表面的状态有着较高的要求，因此有时膜片钳实验的成功与否可以直接认为是成也细胞状态，败也细胞状态。细胞培养技术作为生命科学实验技术的基础，实验操作本身并没有多么复杂的流程和难点，但是为什么好多实验人员还会为细胞状态不好而烦恼呢？其实，除了细胞系本身的一些培养特点以外，细胞培养过程中的一些操作流程也有着很多的注意事项和小技巧。

       Sophion为提高QPatch和Qube膜片钳系统的实验成功率，在细胞培养方面做了一系列的优化，而这些小技巧同样适用于手动膜片钳系统细胞的培养。本文从细胞复苏、传代、消化、冻存以及其他操作过程中一些需要注意的微小细节出发，介绍了如何提升细胞培养状态，帮助提高膜片钳实验的成功率。

细胞复苏和培养

       在复苏新的细胞株时，我们推荐在开始时先将冻存管中的细胞转移到T75培养瓶进行培养。当然，如果已知复苏的细胞株是生长缓慢的细胞时，也可以使用T25培养瓶。需要注意的是，在这一过程中一定要尽可能快的解冻细胞，一般是在37°C 水浴锅中进行，严格遵循慢冻快融的原则。在复苏过程中要做好无菌操作，尽可能避免触碰冻存管盖子接口，避免造成污染。在细胞长到80%时进行传代。

细胞的消化

       细胞消化对制备膜片钳细胞样本而言尤为重要。消化不到位，细胞容易成团，无法制备出好的单细胞悬浮液，而消化太过，则会导致细胞膜表面的结构被破坏，这会严重影响后续细胞的封接、破膜。在细胞消化时，我们推荐在细胞生长到80%时，使用无镁钙离子的PBS冲洗两次，然后加入消化酶，在培养瓶中加入的消化酶量Z好把细胞层完全覆盖稍有多余，不宜在培养瓶中加入太多的消化酶，避免过度消化。加入消化酶后，Z好在37°C培养箱中进行消化，要随时关注细胞的消化状态，终止消化时要加入足够的完全培养液，防止过度消化。

       消化酶的使用并不是唯一固定的，根据细胞的生长特性，每种细胞都有其更加适合的消化酶。例如，Trypsin的消化作用更强，消化速度更快，对一些细胞膜强壮且贴壁生长较紧密的细胞系消化效果非常好；Detachin消化作用较为柔和，消化速度较慢，且不容易破坏细胞膜表面，对一些比较娇弱的细胞很友好。消化酶的选择在实验过程中十分重要的，更多细节的描述可以从下文的应用报告中获得。

培养箱

       培养箱的管理是细胞培养过程中很容易被忽略的一环。温度的稳定性是维持细胞稳定生长的关键。很多实验室的细胞培养箱是公共使用的，操作人员众多导致细胞培养箱门频繁开关，这使得培养箱的内部环境一直在发生变化，细胞生长的状态受到了严重的影响。除此之外，频繁的与外界环境接触也容易导致细胞的污染。因此，我们建议有条件的实验室，把实验用细胞和传代保种细胞分开进行培养，保持培养箱的洁净，减少外界环境对细胞的影响。

细胞冻存

       大部分的细胞在培养一定的时间段后，会丧失它的一些表达特征，因此我们要对细胞即时进行冻存。细胞在冻存时一定要按该细胞冻存指南配置合适无菌的冻存液，其细胞的密度，体积都应当注意，细胞密度要合适，体积不易太多，包括冻存管的质量也要进行确认，避免复苏时冻存管炸裂。现在大部实验室使用冻存盒进行细胞冻存，要注意及时将冻存盒里的细胞转移到液氮罐中。

       以上是，Sophion在细胞培养方面的一些小技巧，更详细的内容，例如传代细胞密度等，大家可以阅读下方的应用报告。针对一些特殊的稳转细胞的特殊处理培养方式，Sophion也做了大量的工作，有需要的小伙伴也可以通过官网或者发邮件获得相关的资料。