植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书-上海语燕生物技术有限公司

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植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途植物游离氨基酸含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过显色染料茚三酮与游离氨基酸的氨基发生反应，在热处理下，产生蓝色复合物，由分光光度仪比色分析，定量检测样品中游离氨基酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心设计、成功实验证明的。适用于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）等裂解悬液样品的游离氨基酸含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。技术背景氨基酸（aminoacid或α-aminoacid）是一种含有胺和羧基功能基团的分子，为生物体中Z必须的元素。根据其侧链的不同，分成四类（弱酸、弱碱、极性、非极性）和20种各种不同的氨基酸；根据其光学异构体（opticalisomers），又分成L型和D型。L-氨基酸是构成蛋白质的主要结构分子。氨基酸是多肽、蛋白质和辅酶等的组成单位，具有各种代谢作用和营养价值。基于游离氨基酸的游离氨基与茚三酮（ninhydrin）反应，产生中间产物酮酸（ketoacid）和氨分子，进而在热处理下，进行脱羧基过程（仅发生于游离氨基酸），同时产生蓝色复合物，在分光光度仪（570nm波长）下，呈现吸光峰值的变化，来定量分析游离氨基酸的总含量。其反应系统如下：产品内容清理液（ReagentA）毫升萃取液（ReagentB）毫升缓冲液（ReagentC）毫升反应液（ReagentD）毫升标准液（ReagentE）微升产品说明书1份保存方式保存萃取液（ReagentB）和标准液（ReagentE）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（ReagentD）具有挥发性，严格密闭瓶盖，避免光照；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于标准液配制和样品操作的容器15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器干式恒温仪：用于反应孵育DOUNCE匀浆器：用于裂解组织微型台式离心机：用于样品操作比色皿：用于比色分析的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤一、样品准备准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管（选择步骤）加入xx毫升清理液（ReagentA）清洗1次即刻用刀片切碎组织放进一个预冷的15毫升锥形离心管加入预冷的xx毫升萃取液（ReagentB）涡旋震荡5秒，充分混匀即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf5415）小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的1.5毫升离心管（选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf5415）移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、标准样品配制准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管分别加入xx微升缓冲液（ReagentC）到1至5号管移取xx微升标准液（ReagentE）到1号管，混匀小心移取xx微升1号管稀释的标准液（ReagentE）到2号管，混匀小心移取xx微升2号管稀释的标准液（ReagentE）到3号管，混匀小心移取xx微升3号管稀释的标准液（ReagentE）到4号管，混匀将1至5号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表管号缓冲液（ReagentC）标准液（ReagentE）标准氨基酸浓度1xx微升xx微升xx微摩尔/升2xx微升xx微升1号管xx微摩尔/升3xx微升xx微升2号管xx微摩尔/升4xx微升xx微升3号管xx微摩尔/升5xx微升00微摩尔/升标准曲线测定加入xx微升缓冲液（ReagentC）到1.5毫升离心管加入xx微升上述配制的标准液（ReagentE）加入xx微升反应液（ReagentD）涡旋震荡15秒放进90℃干式恒温仪孵育5分钟，避免光照放进冰槽里1分钟转移到比色皿即刻放进分光光度仪检测（波长570nm）：获得吸光读数重复实验步骤1至8四次构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准氨基酸浓度（微摩尔/升）样品测定加入xx微升缓冲液（ReagentC）到1.5毫升离心管加入500微升待测样品加入xx微升反应液（ReagentD）涡旋震荡15秒放进90℃干式恒温仪孵育5分钟，避免光照放进冰槽里1分钟转移到比色皿即刻放进分光光度仪检测（波长570nm）：获得吸光读数根据标准曲线获得样品对应氨基酸浓度（微摩尔/升）浓度计算根据标准曲线获得样品对应氨基酸浓度（微摩尔/升）X稀释倍数=（微摩尔/升）注意事项本产品为25次操作，包括标准样品避免使用Tris缓冲液、尿素等胺类物质处理样品操作时，须戴手套系统操作时，标准样品测定只需1次反应液（ReagentD）具有挥发性，严格密闭瓶盖，避免光照孵育时，避免光照本公司提供系列氨基酸检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感