Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR是Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)的升级版,可在同一管中进行逆转录和基因组去除两个反应,操作简便,可有效降低复杂加样过程造成的样品污染和RNA降解的风险。本产品中5×Hifair® One Step RT SuperMix中含逆转录反应所需的全部试剂(Hifair® V Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, Oligo(dT)18 Primer, Random Primer, dNTPs, Buffer),反应时只需加入gDNA Remover Mix、模板RNA和水即可高效地合成一链cDNA,同时去除基因组DNA污染。另外,本产品提供了5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix,用于配置无逆转录酶的对照,判断qPCR模板是否来自cDNA。
本产品中的Hifair® V Reverse Transcriptase可耐受高达60°C的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。逆转录产物兼容探针法与染料法qPCR,探针法与染料法qPCR Mix分别推荐翌圣Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211)和Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184),进行高性能基因表达分析。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品规格 | |
11142ES10 (10 T) | 11142ES60 (100 T) | ||
11142-A | 5×Hifair® One Step RT SuperMix | 40 μL | 400 μL |
11142-B | gDNA Remover Mix | 10 μL | 100 μL |
11142-C | 5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix | 20 μL | 40 μL |
11142-D | RNase free H2O | 1 mL | 2×1 mL |
产品应用
后续适用于qPCR实验。
运输和保存方法
冰袋运输。-20°C保存,有效期12个月。
注意事项
1)所有操作均应在冰上进行,且操作过程应避免RNase污染。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3)本产品仅作科研用途!
一链cDNA合成操作步骤
1. 反应体系配置:在冰上融化11142-A/B/C组分,将试剂各组分充分震荡混匀,并在RNase-free离心管中配置如下体系:
组分 | 使用量 |
RNase-free H2O | To 20 μL |
5×Hifair® One Step RT SuperMix | 4 μL |
gDNA Remover Mix | 1 μL |
Total RNA | 10 ng-1μg |
No-RT Control反应(可选)
5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix,用于配置无逆转录酶的对照,判断qPCR模板是否来自cDNA。
组分 | 使用量 |
RNase-free H2O | To 20 μL |
5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix | 4 μL |
gDNA Remover Mix | 1 μL |
Total RNA | 10 ng-1μg |
2. 轻轻混匀,按照如下程序进行逆转录
温度 | 时间 |
30°C | 5 min |
55°C | 15 min |
85°C | 5 min |
【注】:1. 逆转录温度:推荐使用55°C。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60°C。
逆转录产物可立即用于后续qPCR反应,也可-20°C短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80°C保存,避免反复冻融。
HB221019
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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