为度链霉亲和素磁性微球助力生物素化分子的高效分离纯化

根据捕获的目标分子和下游应用的不同，可以选择直接法或间接法捕获目标分子。直接法是将生物素化的配体首先与链霉亲和素磁性微球结合，再与样品进行孵育，Z后通过磁分离即实现靶标的捕获，通常适用于靶标的快速检测。间接法是生物素化配体先与样品中的目标分子结合形成复合物，再将此复合物与链霉亲和素磁性微球共孵育，磁分离后即实现靶标分子的捕获。间接法适用于靶点浓度较低、特异的亲和力较弱或结合动力学较慢的实验中，如NGS靶向捕获测序应用。

1）DNA结合试剂：D-Binding Buffer: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM EDTA, 2 M NaCl；D-Washing Buffer: 5 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.5 mM EDTA, 1 M NaCl

2）RNA结合试剂：以下试剂应均用Nuclease-free ddH₂O配制：R-Binding Buffer: 0.1 M NaCl；R-Washing Buffer: 0.1 M NaOH, 0.05 M NaCl

3）蛋白结合试剂：PBST Buffer: PBS (pH 7.4), 0.05% Tween 20；PBS/BSA Buffer: PBS (pH 7.4), 0.01% - 0.1% BSA

4）核酸释放试剂：95%甲酰胺溶液(95%甲酰胺 + 5% 10 mM EDTA (pH 8.2))

5）蛋白释放试剂：0.1% SDS

磁性微球预处理

1）将磁性微球平衡至室温后，置于涡旋振荡仪上30 s充分混匀，用移液器吸取磁性微球至EP管中，置于磁力架上，溶液澄清后（约1min）吸弃上清。

2）将EP管从磁力架上取出，加入初始磁性微球量2倍体积的D-Washing Buffer（DNA捕获）或R-Washing Buffer（RNA捕获）PBST Buffer（蛋白捕获），置于涡旋振荡仪上重悬10 s。

3）短暂离心后，将EP管置于磁力架上，溶液澄清后吸弃上清。

4）DNA捕获与蛋白捕获重复步骤2,3两次，RNA捕获重复步骤2,3一次。

1）向预处理后的磁性微球(弃尽上清)中加入2倍原始磁性微球体积的D-Binding Buffer，再加入和D-Binding Buffer等体积的生物素化DNA样本，充分混匀后，室温下置于垂直旋转混匀仪中孵育15 - 30 min，短暂离心后，将EP管置于磁力架上，溶液澄清后吸弃上清。

注：混匀的转速不可过高，建议20 - 30 rpm。

2）加入2倍样本体积的D-Washing Buffer于EP管中，用移液器吹打10次充分混匀。短暂离心后，将EP管置于磁力架上，溶液澄清后吸弃上清。

3）重复步骤2一次。

4）根据后续实验的要求，加入合适的缓冲液重悬磁性微球，磁性微球可用于后续操作。

1）向预处理后的磁性微球(弃尽上清)中加入2倍原始磁性微球体积的R-Binding Buffer，置于涡旋振荡仪上重悬约10 s。短暂离心后，将EP管置于磁力架上，溶液澄清后吸弃上清。

2）加入2倍原始磁性微球体积的R-Binding Buffer，再加入与R-Binding Buffer等体积的生物素化RNA样本，充分混匀后，室温下置于垂直旋转混匀仪中旋转15 - 30 min，短暂离心后，将EP管置于磁力架上，溶液澄清后吸弃上清。

3）加入2倍样品溶液体积的R-Binding Buffer溶液于EP管中，用移液器吹打10次混匀，短暂离心后置于磁力架上，溶液澄清后吸弃上清。

4）重复步骤3一次。

5）根据后续实验的要求，加入合适的缓冲液重悬磁性微球，磁性微球可用于后续操作。

1）向预处理后的磁性微球(弃尽上清)中加入2倍原始磁性微球体积的PBST Buffer，再加入待捕获的含有生物素化蛋白的样本，充分混匀后，室温下置于垂直旋转混匀仪中孵育15 - 30 min，短暂离心后，将EP管置于磁力架上，溶液澄清后吸弃上清。

2）加入2倍原始磁性微球体积的PBST Buffer或PBS/BSA Buffer于EP管中，用移液器吹打10次充分混匀，短暂离心后，将EP管置于磁力架上，溶液澄清后吸弃上清。

3）重复步骤2一次。

4）根据后续实验的要求，加入PBST Buffer或PBS/BSA Buffer或其他合适的缓冲液，重悬磁性微球。磁性微球可用于后续操作。

生物素修饰的核酸/蛋白释放

1）核酸与链霉亲和素磁性微球分离：加入95%甲酰胺溶液后，65℃加热5 min或90℃加热2 min，释放核酸。

2）蛋白与链霉亲和素磁性微球分离：加入0.1% SDS溶液后，煮沸5 min使蛋白分离。