口蹄疫O型抗体检测试剂盒

一、口蹄疫O型抗体检测试剂盒

通用名：口蹄疫病毒O型IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine foot and mouth disease virus (ELISA)

二、包装规格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒

三、预期用途 口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病。在猪的预防免疫工作中，值得关注的就是强化免疫的接种时机问题。在过高的抗体水平进行免疫，过高的抗体水平还会中和疫苗，影响疫苗的免疫效果，导致免疫失败；在较低的抗体水平进行免疫，又会出现抗体保护真空期，威胁猪的健康。

猪口蹄疫O型抗体试剂盒用于检测猪血清、血浆中猪口蹄疫病毒O型抗体，可用于猪口蹄疫病毒O型疫苗免疫效果评价。

四、口蹄疫O型抗体检测试剂盒原理

本试剂盒系由预包被猪口蹄疫病毒O型（OZK/93株+OS/99株）VP1表位多肽抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪口蹄疫病毒O型抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪口蹄疫病毒O型抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪口蹄疫病毒O型抗体。

五、口蹄疫O型抗体试剂盒组成

酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照

六、储存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

七、适用仪器  含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

​【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用工作洗涤液将待检牛、羊血清先按32倍稀释（如5μl血清加入155μl工作洗涤液中，混匀），待检猪血清按16倍稀释（如5μl血清加入75μl洗涤液中，混匀），阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl，样品孔每孔先加入工作洗涤液25μl，再加入稀释后的样品25μl；都加入抗原液50μl。

注：加入抗原后牛、羊样本稀释比例相当于1:128，猪样本稀释比例相当于1:64。

4.震荡混匀10秒，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，一次拍干。

6.每孔加抗体工作液50μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔加酶标记物50μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

9.洗涤，同步骤5。

10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应15分钟

11.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A值）。

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照A值≥0.8，阳性对照A值≤50%×阴性对照A值。