细胞电转染效率不佳的原因探究

细胞电转染效率不理想，可能由以下因素所致：

电场强度未达优。电场强度在电转染实验中扮演着关键角色。若电场强度过高，会大幅增加细胞的死亡率。这是由于过强的电场对细胞产生过度刺激，导致细胞内部结构严重受损，无法维持正常的生理功能。反之，若电场强度过低，则无法有效增强细胞膜的通透性，难以在膜上构建适宜的小孔，致使外源物质难以进入细胞内部。值得注意的是，不同细胞系因其独特的膜结构特性、生理功能以及对外源刺激的响应机制，各自具有特定的佳场强值。这就要求在开展实验前，务必精确测定所转染细胞系的电场强度。通常，这需要进行一系列细致的预实验。在预实验中，逐步调整电场强度，并密切观察细胞的转染效率和存活状况。通过对实验数据的综合分析，方能准确确定适宜的电场强度条件，为后续的正式实验奠定坚实基础。

细胞选择不当。在电转染过程中，一般应选取处于对数生长期的细胞（通常为 15 代以内，且在传代后 2 天）。处于此阶段的细胞，其分裂活动极为活跃。与稳定期的细胞相比，它们的表面结构相对疏松，这一特点使得细胞膜在电转染操作中更易于发生变化。而且，在电转染完成后，这类细胞的细胞膜恢复能力较强。此外，处于有丝分裂期的细胞，因其处于细胞周期的特殊阶段，对于外源 DNA 的接纳能力显著增强，从而能够有效提升转染效率。若选择了不恰当的细胞，例如处于衰老期或状态不佳的细胞，其细胞膜的特性和生理功能可能不利于电转染的进行，从而严重影响转染效率。

质粒质量存在缺陷。在电转染实验中，所采用的质粒质量至关重要。高质量的质粒应具备极高的纯度，具体表现为 DNA/RNA 的纯度应达到极高水平（A260/A280>1.8），且不能含有内毒素。内毒素的存在可能引发细胞的免疫应激反应，干扰正常的转染进程以及后续的细胞生理活动。同时，质粒应溶解于双蒸水，而非 TE 缓冲溶液。这是因为 TE 缓冲溶液中的某些成分可能与电转染过程中的物理化学条件相互作用，产生不利影响。此外，DNA 的浓度也需要严格把控。过高的 DNA 浓度可能导致细胞内渗透压失衡，破坏细胞内部的稳态环境，影响细胞的正常生理功能，进而显著降低转染效率，甚至导致细胞死亡。