干货分享！实时荧光 PCR 检测技术在沙门菌血清鉴定中的应用

沙门氏菌是一种较常见的食源性肠道致病菌，是肠杆菌科中Z复杂的菌属，其抗原结构主要由菌体抗原( O 抗原) 、鞭毛抗原( H 抗原) 及表面抗原( Vi 抗原等) 3 部分组成。根据各抗原组成的不同，可将沙门菌分为不同的血清型，目前已确认的有2 600多种血清型，我国已检出 300 余种。

由不同血清型沙门氏菌引发的疾病类型会有所差异，沙门氏菌血清型的准确快速鉴定对暴发流行中的溯源分析具有重要意义。实时荧光 PCＲ 法和传统的玻片凝集法是沙门氏菌血清分型的两种不同检测方法，本研究对比两种方法在实验操作、检测成本及灵敏度等方面的差异，了解实时荧光 PCR检测技术在沙门氏菌血清分型中的实际应用价值。

菌株来源

144 株沙门菌分离来自不同样本。

比对方法

玻片凝集法，和实时荧光PCR法（美正生物沙门菌血清型分子鉴定试剂盒）

01方法介绍

玻片凝集法

将 144 株待检测的沙门氏菌株分别接种于血琼脂平板，37℃ 培养箱中培养 18 ～ 24 h后，进行玻片血清凝集反应。先做 O 多价血清，再做O 单价血清，确定 O 群后再做 H 多价及 H 单价血清。将 O、H 相凝结果与 Kaufmann-White 沙门氏菌抗原表对照，检索出血清型。

实时荧光PCR法

北京美正生物科技有限公司的沙门氏菌血清型分子鉴定试剂盒是根据沙门氏菌种编码抗原基因特异性进行高通量筛选，Z终筛选出 12 个沙门菌基因，并以此建立沙门氏菌血清型数据库，此数据库目前包含 128种常见沙门氏菌血清型。采用实时荧光 PCＲ 技术检测待测菌株目的基因，记录样品不同预混液( MSS01-MSS12) 对应通道的 Ct 值，并将其转化为单重断定式，输入试剂盒配套的沙门血清鉴定表，得到血清型鉴定结果。

02统计分析

采用 SPSS 22. 0 软件进行统计分析，以玻片凝集法鉴定结果为金标准，对实时荧光 PCＲ 法进行效果评价，统计指标包括灵敏度、特异度、约登指数，并将两种方法检测结果进行 Kappa 一致性检验，若 Kappa 值＞0. 5，则说明一致性较好。以 P＜0. 05 为差异有统计学意义。

03结果分析

实时荧光 PCＲ 法检测结果中，与玻片凝集法的鉴定结果完全一致 134株，且 4 种优势血清型( 德尔卑沙门菌、鼠伤寒沙门菌、姆班达卡沙门菌和里森沙门菌) 结果完全一致; 与玻片凝集法不一致菌株 10 株，分别为伦敦沙门菌、婴儿沙门菌、纽波特沙门菌、西安普顿沙门菌、恩戈尔沙门菌、阿伯丁沙门菌、罗森沙门菌、伊丽莎白维尔沙门菌、罗米他沙门菌各 1 株。可能与致病菌自身部分待测基因环境或宿主的改变发生突变，进而基因组呈现多样性有关。4 种沙门菌优势血清型两种方法分型结果完全一致，且此血清型分布与 2017年无锡市食品行业从业人员沙门菌血清分布基本一致。

04总结讨论

玻片凝集法直观且可靠性高，是目前公认的沙门菌血清分型金标准。但耗时长，操作过程复杂，需尝试的血清诊断试剂较多，鉴定成本高，常要受制于试剂种类与质量优劣，且需多次诱导时具有一定鉴定难度。部分粗糙型自凝性沙门菌利用玻片凝集法不能进行分型。个别情况下沙门菌的抗原与血清凝集反应程度较弱，对实验人员经验和操作水平要求高。

实时荧光 PCＲ 法是基于目标基因簇中特定区域或基因片段，操作简单，不易出现差错，对普通实验人员来说从分离培养、提取核酸到检测、记录 Ct 值、确定血清分型Z多仅需要 1 d，且常规的一块 96 孔 PCＲ 板可以同时检测 8 份样本，极大缩短了检测时间。但实时荧光 PCＲ 法对一些不常见、存在交叉情况的血清型鉴定时，尚无法准确判断沙门菌血清型。

采用实时荧光 PCＲ 检测技术效果良好，尤其当检测量较大时，检测效率较高; 对较不常见或血清型存在交叉的菌株，在实时荧光 PCＲ 法的基础上，再有针对性地进行凝集试验，可省去逐一用血清试剂做凝集反应的繁琐步骤。

（文章来源：王雅静,管红霞,沙丹等.实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清鉴定中的应用[J].江苏预防医学,2023,34(01):105-107.）

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