重生之蛋白印迹膜（stripping buffer）
2024-07-1940什么是WB(Western Blot)
蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）是一种基于抗体技术的经典蛋白质分析方法，常用于鉴定某种蛋白，并能对该蛋白进行定性和半定量分析，在分子生物学、生物化学、免疫遗传学等方面有着广泛的应用。
WB常规实验流程
什么是WB(Western Blot)
首先，为了实现重生
要在瑶池里泡七七四十九天
再通过天雷锤炼九九八十一下
最后，再......
（呸，这么久鬼才选择重生）
什么是WB(Western Blot)
当然我们的蛋白印迹膜想要实现一张膜进行多中抗体检测，肯定不会经历这么繁琐的步骤啦，我们可以使用蛋白印迹膜再生液来实现Western blot中转移了蛋白后膜的重复利用。
有的看客会问为什么我们要重复利用蛋白膜呢？因为在Western blot中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时我们还需要检测 Actin 、Tubulin 等表达量相对稳定的蛋白作为参照，或检测其它蛋白进行比较。这时我们就可通过使用蛋白印迹膜再生液中特殊成分解离一抗二抗与印迹膜上抗原的结合从而去除一抗二抗，即可非常方便地重新利用同一张膜检测其它蛋白。
同时相比较重新跑一个SDS-PAGE胶，使用蛋白印迹膜再生液不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使得实验结果的可比性大大增强。最快15-30分钟就可以完成洗脱全过程。
如何选择蛋白印迹膜再生液？
我们在选择蛋白印迹膜再生液时可遵循以下原则：
1. 对蛋白作用温和，不影响目的蛋白；
2. 适用范围广，能够在多种膜上使用；
3. 无毒无味，可在室温条件下使用保存；
4. 洗脱效果好，能去除在WB中难以去除、需长孵育时间或孵育温度在22°C以上的抗体。
再生液产品哪家好？
博鹭腾
博鹭腾依据上述的原则及特点，推出了两款蛋白印迹膜再生液，其适用于 PVDF 膜和 NC 膜上的 ECL 化学发光检测后的膜再生。
使用方法
1、使用前将 5×蛋白印迹膜再生液用去离子水稀释为1倍。
2、将膜放在洁净的玻璃平皿中，倒入 20 mL 的 1× PBS 或 1× TBS 溶液，轻微振荡 10 min，倒去 PBS 或 TBS 溶液。
3、加入 10~20 mL 的 1× Stripping Buffer，室温下振荡 20~60 min，倒去溶液。
4、倒入 20 mL 的 1× PBS 或 1× TBS 溶液，轻微振荡 10 min，倒去 1× PBS 或 1× TBS 溶液，重复 1 次。
5、倒入相应的封闭液，准备进行下一轮的 Western Blot。
案例分享
注：样品为bela细胞裂解液
图1为beta-actin抗体孵育后ECL发光图片
图2为博鹭腾强烈型抗体洗脱液洗脱50min后ECL发光图片
图3为beta-actin抗体重新孵育后ECL发光图片
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博鹭腾
博鹭腾作为一家集生命科学仪器设备的研发、生产、服务于一体的国家高新技术企业，目前已开发并上市了多款具有自主知识产权的产品，形成了活体影像、分子影像、细胞影像以及配套试剂四个系列，用户包括清华大学、中山大学、南京大学、西北农林科技大学等上百家高校及科研单位。
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