热点应用丨如何对不平整样品进行完 美拉曼成像？

在制药行业，了解片剂的成分对于研发和质量控制都很重要。显微拉曼是进行此类分析的完 美技术，其指纹级别的光谱识别意味着活性药物成分 (API) 可以通过获得的结晶度和多态性的细节进行轻松区分。当与共聚焦显微镜耦合时，我们现在可以获得有关API 分布的全面信息。

显微拉曼是一种非破坏性技术，这意味着可以对整个药片进行分析，而不会对其结构或有效性造成任何破坏风险。整个药片都可以进行拉曼成像，这种方法的存在的一个问题，药片并不是完全平坦的。表面粗糙，药片经常印有字母或中间有一个凹陷，可以快速分割成半剂量。

爱丁堡共聚焦显微拉曼光谱仪

图1. （a）RM5与（b）RMS1000拉曼光谱仪

RM5和RMS1000拉曼光谱仪本质上都是真正的共聚焦，并提供一系列激发波长。RM5最多可容纳3个内置激光器，RMS1000最多可容纳5个内置激光器，还可增加额外的外部激光器；这两款仪器每个光谱仪都能够容纳多达5块计算机控制的光栅；RM5最多可集成2个检测器，对于升级版的RMS1000最多可集成4个检测器，以涵盖不同领域的所有应用。使用RM5和RMS1000的Ramacle® 软件生成数据图，以提供对样品成分和分布的深入了解。

图2: (a) 单个 Z 点处的离焦白光图像，(b) 表面成像的2D 视图，(c) 表面成像的3D形貌视图

Ramacle® 软件使用Surface Mapping功能来处理带有不平坦的表面样品。Surface Mapping功能通过在整个样品表面高度获取 Z轴堆叠图像并处理它们以形成一个最 佳聚焦图像，获得完全聚焦的表面图像，如图2。每个XY点的最 佳聚焦Z轴值存储在Ramacle®中，因此拉曼成像时，可以确保所有点都完全聚焦，如图 3。

图3: 药片的伪色3D拉曼成像图（左）及其光谱（右）的。蓝色为扑热息痛，橘红色为阿司匹林，绿色为咖 啡因。

图 3 显示了生成的拉曼表面成像图，该图显示了整个测量过程中样品都处在聚焦的状态。可以清楚地看到片剂的表面形状，3 种 API 在空间上得到很好的分辨，分别为扑热息痛（蓝色）、阿司匹林（橘红色）和咖 啡因（绿色）。