用近重直(小倾角 10º)转头快速分离 RNA
2021-04-14772超速离心机可进行生物大分子的分离,特别是大量样品样品纯化的时候,本文将介绍 使用 himac (前身为日立工机) 超速离心机及近垂直转头进行 RNA 快速分离的方法。
◆ 设备:Hitachi CP 100NX, 及 P90NT 转头
CP100NX
近垂直转头
◆ 溶液:
A 液:0.5% SDS,20mM Sodium acetate 10mM EDTA (PH5.5)
B 液:0.5% Sodium N—lauroyl sarcosinate (N—月桂肌氨酸钠) 20mM Sodium acetate ,10mM EDTA (PH5.5)
C 液:5.7M CsCl,0.1M EDTA (PH5.5)
◆ 离心顺序:
1.培养好的 E.coli 600 液,高速离心,50ml PP 或 PA 管,9200 rpm×20 分,4 ℃
2.每管沉淀加 1ml A 液,再加 1ml phenol 混匀,60℃,振荡器上摇 5 分钟
3.混匀后注入 7ml PP 或 PA 离心管,每管试剂容量 5—5.5 ml (日立 CR22N 高速 冷冻离心机及 R22A 高速转头,18×7ml ),9400 rpm , 4℃离心 5 分钟。
4.每管取出 800ul 上清液加入 2.5 倍乙醇,再加入 1.2 ml 溶液 B,Z终溶积为 4 ml。
5.超速离心管(5PA 密封管),每管先加 2 ml 混合液,然后用注射器深入离心管底 部,每管加入约 3 ml 溶液 C 直到加满。
6.用日立 STF3 自动熔封管器封口后(见下图),放入 P90NT 转头 85,000rpm ,15℃, 离心 2 小时,加速“5”,减速“7”
注:不可超过 8.5 万 rpm,否则可能引起 CsCl 结晶。
STF3
结果:
离心后 RNA 沉淀在离心管底部,DNA 在中下部溶液中。
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(来源:天美(ZG)科学仪器有限公司)
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- 日本himac超速离心机CP70NE
- 品牌:日本Himac
- 型号:CP70NE