水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测

1 样品准备/提取

1）、称取已粉碎（已均质）的样品1 g于15 mL离心管中，加入1 mL 0.05 mol/L苯磺酸溶液、1 mL0.25 g/mL盐酸羟铵溶液、0.4 mL0.1 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)和8 mL乙腈，涡旋混合2 min，4000 rpm离心1 min；

2）、将上清液转移至50 mL离心管中，残渣按照步骤1重复提取一次；

3）、合并两次提取液，并加入6 mL和7 mL水，涡旋混合1 min，4000 rpm离心1 min；

4）、取下层清液于旋蒸瓶中，向上层清液加入6 mL，重复提取一次；

5）、合并两次下层溶液，40℃减压蒸至近干，加入5 mL乙腈待净化。

2 SPE柱净化——ProElut Al-N（1 g/6 mL）（Cat.#：65306）上层 ProElut SCX（500 mg/3 mL）（Cat.#：63604）下层

(1)活 化：加入10 mL乙腈，流出液弃去；

(2)上 样：将待净化液加入小柱，流出液弃去；

(3)淋 洗：加入5 mL乙腈淋洗小柱，流出液弃去，并去掉上层Al-N小柱；

(4)洗 脱：加入5 mL5%氨水乙腈，收集洗脱液；

(5)重新溶解：将洗脱液在40 ℃下减压蒸干，1 mL定容液*溶解残渣，过微孔滤膜供HPLC分析。

*定容液：乙酸铵缓冲液：盐酸羟铵溶液=2：1 乙酸铵缓冲液：乙腈：0.05 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)=75:25； 盐酸羟铵溶液：取1 mL0.25 g/mL盐酸羟铵溶液用水定容至100mL

分析条件 色谱柱：Platisil ODS，250 x 4.6 mm，5μm（Cat.# 99503）

流 速：1.0 mL/min

检测器：UV 591 nm和UV 266 nm

柱 温：30 ℃

进样量：20 μL

流动相：A：乙腈 B：0.05 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)

本方法适用于水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测。

孔雀石绿，结晶紫