不溶性微粒检查专题介绍3-不溶性微粒的检查方法介绍

药典不溶性微粒检查方法介绍：

不溶性微粒检查根据中国药典2020版和USP的检查规定，总共有三种方法：光阻法Light Obscuration、显微计数法Microscopic和动态图像法Flow Imaging。其中光阻法和显微计数法规定的质量放行的方法，而动态图像法目前还是推荐研究的方法，特别是针对蛋白注射液。但是Z新的USP1788章节也收录了动态图像法，代表动态图像法将来会有更多的应用场景。下面我们分布对三种方法的原理和优缺点做一个简单介绍：

药典不溶性微粒检查方法一法：光阻法Light Obscuration

根据中国药典2020版的描述，当液体中的微粒通过一窄细检查通道时，与液体流向垂直的入射光，由于被微粒阻挡而减弱，因此由传感器输出的信号降低，这种信号变化与微粒的截面积大小相关。

通过这些输出信号的变化，得到颗粒大小和数量的结果。具体原理图如下图所示：

因此光阻法原理的检查优势，就是操作简单，检查快速，能满足大多数产品的检查需求。然而由于检查原理的限制，也存在一定的缺点，一就是无法检查高浓度的样品，因为容易出现颗粒重叠或者互相阻挡的结果；第二无法识别气泡和硅油等，会出现假性的结果；第三对于有颜色的样品（特别是对于深颜色的样品）和有粘度的样品，容易出现假性结果。

药典不溶性微粒检查方法第二法：显微计数法Microscopic

显微计数法的操作原理是待测样品过滤到滤膜上，在100倍的放大倍率下对滤膜上的颗粒进行观察，对比目镜测微计中的参考圆，列举滤膜上不同尺寸范围内粒子的数量。

因此，跟光阻法相比，显微计数法的优点也很明确，一就是不仅可以看到颗粒的大小，还能观察到颗粒的形貌；第二就是反映体系真实的不溶性微粒结果，避免气泡、硅油、样品颜色和粘度的影响。当然缺点很明显，就是需要一个制备样品的过程，需要先把样品过滤到滤膜上面，然后在进行检查。虽然我们胤煌YinHuang自主研发的设备已经集自动制样和自动于一体，但是跟光阻法相比，它还是操作比较复杂。

药典不溶性微粒检查方法第三法：动态图像法Flow Imaging

动态图像法，简单的讲，你可以把它想成是光阻法和显微计数法的结合，让样品流动起来，然后不断的进行拍照和成像。从而得到颗粒大小、数量和形貌的分布。

所以，动态图像法的优点是一次测量，同时得到颗粒大小、数量和形貌的数据，因此像气泡、硅油、蛋白聚集等，对于工艺的研究和开发有着非常大的帮助。那为什么这么好的方法却不是质量放行的方法呢，主要是以下缺点：一就是因为输出的信息相对较多，所以检查效率跟光阻法相比还是有一定的差距，第二受限于原理的限制，检查的样品量相对较少，统计学的意义上有待研究；第三作为一种新兴的方法，在实验数据和方法的积累上还有很长的路要走。

因此，对于不溶性微粒检查来讲，跟颗粒检查的方法类似，没有任何一种方法能cover所有的检查，如果想要真实的了解样品不溶性微粒的结果，需要多种方法的相互配合。