文献速递 | Apexbio科研团队利用Naica三色数字P

非小细胞肺癌（NSCLC）

肺癌是世界上Z常见的恶性肿瘤之一，已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第yi位。其中，非小细胞肺癌约占所有肺癌的80%，约75%的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。

而非小细胞肺癌中Z常见，且有针对性靶向药物的突变就是“表皮生长因子受体”（EGFR）突变。表皮生长因子受体EGFR基因位于第7号染色体短臂上，属于酪氨酸激酶受体。其中EGFR酪氨酸激酶区域的突变主要发生在18～21外显子（见下图）。因此能够尽早发现NSCLC患者EGFR突变情况，就可以针对性的进行相关ZL，减轻病人痛苦，延长生命周期。

▲ EGFR常见突变位点

数字PCR作为第三代PCR技术，凭借高灵敏度、高jingzhun度，对YZ剂有较强耐受能力等优势正逐渐成为无创血浆检测-液体活检的可靠方法。然而，大多数情况下数字PCR的低通量和高成本等因素限制了其在临床检测方面的应用。

艾普拜生物（apexbio）的研发团队近日在知名杂志《British Journal of Cancer》（BJC）上发表了一篇题为Plasma-based early screening and monitoring of EGFR mutations in NSCLC patients by a 3-color digital PCR assay的文章。这篇文章通过高灵敏的数字PCR技术对NSCLC患者血浆中的EGFR水平进行突变检测，并可同时检测EGFR基因第18-21外显子的39个突变，极大提高临床EGFR突变检测能力，尤其是当待测样本有限时，该方法可从少量样本中获得更多基因信息。该杂志影响因子5.791。（详情请见文末）

研究背景：

使用数字PCR基于无创血浆的EGFR突变检测有望成为预测EGFR-TKI效率的快速、灵敏和可靠的方法。然而，数字PCR的低通量和高成本限制了其在临床方面的应用。

方法：

研究者设计了一种数字PCR方法，可以同时检测EGFR基因18-21号外显子的39个突变。为了进行更全面的评估，收集了30例NSCLC患者的回顾性FFPE组织和33例NSCLC患者的血浆进行分析。

结果：

使用Naica Crystal Digital PCR技术测得EGFR突变检测的LOD为0.308 copies/μL，与FFPE组织样本中的ARMS-PCR检测结果相比，33例患者血浆dEGFR39检测的准确度为87.88%（29/33，95%CI 72.67-95.18%）。在对33例患者进行监测时，dEGFR39评估的EGFR突变与ZL的客观反应相关。

此外，dEGFR39比SuperARMS PCR能更早预测TKIZL后耐药的NSCLC患者的临床预后。用dEGFR39对8例患者的13例样本进行了鉴定，这些样本随时间推移具有T790M突变；对这13个样本同时进行SuperARMS检测，仅有9个（69%）被检出。采用IcotinibZL368天后，在患者P-15的血浆中同时检测到L858R和T790M突变。然而，SuperARMS PCR未能检测到T790M突变，此外，直到121天CT结果才有明显的进展。同样，在患者P-25中，dEGFR39结果显示在TKIZL251天后，19Del和T790M的突变丰度增加，比影像学进展提前43天。在患者P-23中，也出现了相似现象。综上所述, dEGFR39 检测T790M突变的发生要早于SuperARMS PCR和CT成像，这一点可在诊断和预后中发挥重要作用。

结论：

该结果表明，dEGFR39分析是可靠，灵敏的，并可极大的节省检测成本。此方法有助于对EGFR突变进行多重分析，以进行TKIZL后的jingmi监测和伴随诊断，尤其适用于组织活检样本较少的患者。

Naica数字PCR平台

法国Stilla Technologies公司的Naica数字PCR技术在进行核酸检测时具有独特的优势。系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片作为数字PCR过程的WY耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要两个半小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获得的数据真实可靠。

期刊介绍：

British Journal of Cancer于1947年开始出版，该杂志包括对整个癌症领域的研究，包括从分子和机理研究到细胞生物学，病理学，实验疗法，流行病学和临床研究的描述，是被引用次数Z多的癌症研究杂志之一，在临床癌症研究方面有重大贡献。