GST融合蛋白纯化
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重组蛋白纯化服务 — GST融合蛋白纯化
GST (Glutathione S-transferase),中文名称为谷胱甘肽巯基转移酶,能够催化GSH(谷胱甘肽)形成GS-GST的复合物。纯化系统是利用GST(glutathione-S-transferase)融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过二硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱的原理进行蛋白纯化。GST全长211个氨基酸,分子量为26kDa,具有高度的亲水性,因此也常被用于改善目的蛋白的可溶性。
---GST融合蛋白纯化步骤:
①从LB平板上挑取单克隆接种到2ml LB液中(Amp+),220-250rpm,37℃振荡培养至OD600值约为0.6;
②按照1:100的比例将活化后菌体接种到TB培养基中,测定起始OD600值,37℃振荡培养,当OD600值增加0.6-1.0单位时(通常3-6小时),加入IPTG至终浓度10μM继续摇床培养3~4h
③4000 rpm离心10min收集菌体
④5-10倍柱体积的lysis buffer重悬细菌,加入PMSF等蛋白酶YZ剂,超声400-600瓦破碎细胞
⑤4℃,8000rpm, 离心20min取上清过谷胱甘肽琼脂糖柱
⑥过柱前后,均用5×柱体积的lysis buffer洗层析柱,收集流穿液
⑦Elution buffer洗脱,收集洗脱峰前,峰中间和峰后,SDS-PAGE鉴定纯度
⑧GST标签移除:凝血酶等酶切后,非变性胶分离纯化。
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