PCR实验室如何规化设计

如何建一个规范的PCR 试验室？PCR试验室如何规划规划才堪称专业？PCR试验室管理又有哪些留意关键？本文让你从0开始搞懂PCR试验室规划规划。

规范的PCR 试验室分为四个区域，分别为：

n1.试剂制造区；

n2.样品处理区；

n3.核酸扩增区；

n4.产品剖析区；

如运用全自动剖析仪，区域可适当合并。

（进入各工作区域必须严厉依照单一方向进行，不同的工作区域运用不同的工作服，例如不同的色彩。工作人员脱离各工作区域时，不得将工作服带出）

一、PCR试验室平面布局【各区的功能分别为】

试剂预备区：扩增试剂的制造、分装和保存。     

样品处理区：样品挂号、分装；核酸提取、保存和加样。    

扩增产品剖析区：扩增产品的测定、成果剖析、挂号及报告。   

扩增前区与扩增后区应严厉分隔，须运用不同的房间，两区之间**有必定的距离。

 运用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂制造。     

在满意下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂预备区可设在同一房间内：    

在生物安全柜内操作；     

每个试验人员、试验组分别运用各自的试剂及耗材；    

盛放污染资料的器皿密封并一次性运用；  

用有用的方法对操作区域和同享器具在试验前后进行清洁及消毒。

二、PCR试验室建造规划关键1、主体结构：

主体为彩钢板、铝合金型材。室内一切阴角、阳角均选用铝合金50内圆角铝，从而解决简单污染、积尘、不易打扫等问题。结构结实，线条简明，美观大方，密封性好。

2、规范的三区分隔和气压调节：

将PCR进程分成试剂预备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的试验区。整个区域有一个全体缓冲走廊。每个独立试验区设置有缓冲区， 一起各区经过气压调节，使整个PCR试验进程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产品对人员和环境的污染。

可打开缓冲区Ⅰ，缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气，在试验区的外墙上和各扇门上都装置有风量可调的回风口，空气经过回风口向室内换气。

3、 消毒：

在三个试验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部装置有紫外灯，供消毒用。

在试剂预备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯，对试验桌进行局部消毒。

4、机械连锁不锈钢传递窗：

试剂和标本经过机械连锁不锈钢（不主张运用电子连锁方式）传递窗传递，确保试剂和标本在传递进程中不受污染（人物分流）

5、 地上

地上主张运用PVC卷材地上或自流坪地上，全体性好。便于进行打扫，耐腐蚀。没有条件的也可选用水磨石地上，或大块的瓷砖（至少800mm×800mm）接缝需求小于2mm。

6、照明

灯具要选用净化灯具，能达到便于清洗、不积尘的特色。

三、在建造的进程中应留意：

●规范的装置流程和全面的服务流程。

●严厉依照规范科学规划的装置流程。

●装置前需求确定以下装置条件，如：电源电压，电源进线方位，电话网络线进线方位，进水水压，Z小装置空间，地上平整度，通风孔、进水管和下水管的方位等，理想状况的空间尺度和通风口尺度。

规划关键：

PCR试验室能够是涣散方式，也能够是组合方式。完结一组PCR试验，通常应经过试剂制造、样品处理、核酸扩增及产品剖析四个试验进程，若试验工艺需求，还应增加样品粉碎进程。

1.涣散方式PCR试验室

所谓涣散方式PCR试验室，是指完结上述试验进程的试验用房互相相距较远，呈涣散安置方式。对于这种安置方式的PCR试验室，由于各个试验之间不易彼此干扰，因此无需特殊条件要求。

2.组合方式PCR试验室

所谓组合方式PCR试验室, 是指完结PCR四个试验进程的试验用房相邻安置，组成独立试验区域的方式。对于组合方式PCR试验室，由于各个试验间集中安置，简单构成彼此干扰，因此，对总体布局以及屏障体系具有必定的要求。各室在入口处设缓冲间，以削减室表里空气交流。

一些经验：试剂制造室及样品处理室宜呈微正压，以防外界含核酸气溶胶的空气进入，构成污染；能够经过操控进风风量大于排风风量达到正压作用。

核酸扩增室及产品剖析室应呈微负压，以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品，能够经过操控排风风量大于进风风量达到负压作用。  

在理想情况下，PCR试验室缓冲间内，可设置正压，使室内空气不流向室外，室外空气不流向室内。 PCR试验室进风由原有ZY空调操控，要求将ZY空调风口装置到指定定点，且高度为地上铺装好后2600mm处。

假如运用荧光PCR仪，扩增室和产品剖析室能够合并。

若房间进深允许，可设PCR内部专用走廊。需求指出的是在削减室表里空气交流方面，缓冲间比专用走廊更有意义。

各个区域之间应具备单向的试验工艺流、物流、人流与气流，构成单向流程的保护屏障，防止试验之间的彼此干扰，防止核酸气溶胶对试验进程构成污染产生假性成果。

试验室的墙体，包括顶棚，应结构结实、气密性好；一切阴角宜选用圆弧形线条过渡；墙体内壁光亮、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒；地上资料应满意无缝隙、无渗漏、光亮、耐腐蚀的要求。

四、PCR试验室主要设备试剂预备区 ：

仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等，加样器、天平除了要专用外，还应有定期校准。   试剂分装应在超净台中进行  扩增反响混合液应运用分子生物学级的，试剂制备好后应有质检：一是否有污染、二是检测试剂的扩增作用。

标本制备区：

仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等

扩增区：

扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并装备UPS电源，以防止由于电压的动摇，停电对扩增作用的影响。

剖析区：

本区所运用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净试验区的缓冲间部分面积不能超过主试验室的八分之一,这是有规定的。

一些琐碎的、不行忽略的规划1.试验室空调通风体系规划及压力操控

PCR试验室并没有严厉的净化要求，可是为防止各个试验区域间穿插污染的可能性，宜选用全送全排的气流组织方式。一起，要严厉操控送、排风的比例以确保各试验区的压力要求。

2.污染的防备与操控  

PCR试验室规划的ZX问题是如何防止污染。在实践工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产品的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发作污染，试验就必须中止，直到找到污染源为止，而且试验成果必须报废，需重新进行试验。所以发作污染后再围绕试验室来寻觅污染源不但耗时而且繁琐，糟蹋人力物力。因此要防止污染，首要应是防备，而不是扫除。

3.PCR试验室不行缺少的严厉管理

（1）严厉操控进出试验室的人员。与试验无关的人员不得随意进出试验室，有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个试验区的门；

（2）尽量削减在试验区内不必要的走动以削减穿插污染的可能性。

（3）扩增产品剖析区是Z主要的扩增产品污染来源，废液不能在试验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离试验室的当地弃掉，用过的吸头等一次性资料也应经消毒液浸泡消毒后一致处理，如燃烧等；

（4）扩增产品剖析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别留意试验人员的安全防护。 3.5齐备的试验室配套设备  齐备的试验室配套设备是确保试验工作的必要条件，应根据各个试验室试验内容的不同装备相应的设备和仪器，如超净工作台、离心机、加样器等。

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