特色方案｜气相色谱法测定保健食品中EPA、DHA和AA的含量

2024-05-1096

气相色谱法测定

摘要

本文使用岛津气相色谱仪GC-2030+岛津气相色谱柱SH-FAME建立了保健食品中EPA、DHA和AA含量的分析方法。样品经皂化和甲酯化处理后，加入异辛烷提取，氮吹浓缩后上机测试。

结果表明，在0.01~2.0 mg/mL的浓度范围内，EPA甲酯、DHA甲酯和AA甲酯的线性相关系数R均大于0.999。取浓度为0.01 mg/mL的标准溶液重复进样6次，各目标物和内标物二十三酸甲酯的峰面积比值的相对标准偏差均小于2%。对测试样品进行加标回收实验，各目标组分加标平均回收率在87.6%~102.8%之间。此方法稳定可靠，可用于保健食品中EPA、DHA和AA含量的测定。

技术特点

参照标准使用BF3-甲醇溶液对脂肪酸甲酯化，样品前处理简单。
使用SH-FAME专用柱对FAMEs进行分离，峰形和分离度均良好。

不饱和脂肪酸是分子中含有一个或多个双键的脂肪酸，是人体必须的营养物质。

二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)和花生四烯酸 (AA)都是常见的多不饱和脂肪酸，它们具有调节血脂、促进智力发育、免疫调节等作用。但部分不饱和脂肪酸在人体内合成效率低，甚至不能合成。为了满足人体正常代谢需要，必须通过食用某些食品或保健品补充。

本文参考SN/T 2922-2022《出口保健食品中EPA、DHA和 AA的测定气相色谱法》，使用岛津气相色谱仪GC-2030+岛津气相色谱柱SH-FAME建立了保健食品中EPA、DHA和AA含量的测定方法。

实验部分

仪器

气相色谱仪: GC-2030

分析条件

GC 参数:

气相柱: SH-FAME, 30 m x 0.25 mm x 0.25 μm, P/N: R227-36324-01

进样口温度: 240 ℃

柱温程序: 190 ℃_2 ℃/min_240 ℃(10 min)

进样量: 1 μL

进样方式: 分流进样

分流比: 5: 1

载气: He

载气控制方式: 恒流模式

初始柱流量: 2.00 mL/min

检测器: FID

检测器温度: 250 ℃

氢气流量: 32 mL/min

空气流量: 200 mL/min

尾吹气流量 : 24 mL/min

样品前处理

样品前处理步骤见图1所示

结果与讨论

3.1

标准品谱图

EPA甲酯、DHA甲酯、AA甲酯和二十三酸甲酯(内标)标准品色谱图和化合物信息分别见图2和表1。

3.2

标准曲线与检出限

用异辛烷分别稀释浓度为0.01、0.02、0.1、0.2、0.5、1.0和2.0 mg/mL 的脂肪酸甲酯标准溶液。以标液中目标物组分和内标物浓度比值为横坐标，以目标物组分和内标物峰面积比值为纵坐标绘制标准曲线。根据0.01 mg/mL标样数据，以3倍信噪比计算各目标组分的仪器检出限，各目标物标准曲线见图3，线性方程、相关系数以及检出限见表2。

3.3

精密度实验

取0.01 mg/mL EPA甲酯、DHA甲酯和AA甲酯混合标准溶液1 μL 进气相色谱仪，连续进样6次，以各目标物和内标物峰面积比值RSD% 考察重复性，结果如表2。

3.4

样品测试结果

取0.02 g某品牌鱼肝油，按照步骤2进行处理，样品测试结果见表3，样品色谱图见图4。

3.3

精密度实验

取0.01 mg/mL EPA甲酯、DHA甲酯和AA甲酯混合标准溶液1 μL 进气相色谱仪，连续进样6次，以各目标物和内标物峰面积比值RSD% 考察重复性，结果如表2。

3.3

回收率

取上述样品0.02 g于试管中，加入EPA、DHA和AA混合标准溶液(0.2 mg/mL)2 mL，按照样品前处理方法平行处理3份，按步骤2进行处理，样品加标量为20 mg/g，平行制样3次。回收率结果见表3。

结论

本文建立了使用岛津气相色谱仪GC-2030+气相色谱柱SH-FAME测定保健食品中EPA、DHA和AA含量的分析方法。结果表明，在 0.01~2.0 mg/mL的浓度范围内，EPA甲酯、DHA甲酯和AA甲酯的线性相关系数R均大于0.999, 线性关系良好。取浓度为0.01 mg/mL的标准溶液重复进样6次, 各目标物和内标物峰面积比的相对标准偏差(RSD%)均小于2%, 精密度良好。对实际样品进行加标回收实验，样品加标量为20 mg/g时，各目标物平均回收率在87.6%~102.8%之间。方法灵敏度高、重复性好，满足标准对应指标，可用于测定保健食品中EPA、DHA和AA的含量。