诺诗乐生物科技(苏州)有限公司
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Namocell 的单细胞分选效率

2019-03-263452

 引言 

在单克隆细胞培养时,手动有限稀释法是Z经典的分离单细胞手段之一。这种方式分离单细 胞,每个孔中落进去的细胞数目符合泊松分布。依靠单细胞分选仪器分离单细胞的效率,无 论从分选能力还是重复性都要明显优于手动的有限稀释方法。测定一款设备分选效率的标准 方法,是用荧光校准微球来分选检验。 

实验方法 

Namocell 单细胞分离仪通过检测 FITC 荧光信号,来分选荧光校准微球(Spherotech)和用 Calcein AM(Thermo Fisher Scientific)染色的 CHO-S 细胞。对于分离的细胞可以用 Calcein AM 染色,用于区分碎片、死细胞和活细胞,然后可以根据 Namocell 推荐的操作流程分离单个 活细胞。为了去除细胞结团,在染色之后可以用 40um 左右的细胞筛网过滤细胞,尽量保证 在上样的时候样本都是单个细胞。作为对照,我们采用 1cell/well 的细胞密度进行手动有限 稀释法铺板。然后,用显微镜在明场下观察每个孔的细胞(或者微球)的数量。同样的实验 持续 7 天,每天做一组对比实验,Z后取平均值。通过统计孔板中单细胞、两个细胞和空孔 的数量来衡量仪器的分选效率。

 实验结论 

在图例中展示了,用 Namocell 单细胞分离仪分离的微球和细胞以及手动铺板的数据对比。 通过 Namocell 单细胞分离仪分选的荧光微球保持了很好的一致性---单细胞 97%,两个细胞 1%,空白 2%。通过 Namocell 单细胞分离仪分选的细胞样本---单细胞 93%,两个细胞 2%, 空白5%。对照样本数据,通过手动有限稀释法得到的分选效率---单细胞31%,两个细胞35%, 空白 34%。 在细胞样本的分散程度比较好的状态下,机器分离的Z高单细胞比例是 97%。对于手动有限 稀释法而言,实验的结果一致性比较差(通过标准差可以看出)。综上所述,Namocell 单细 胞分离仪的分选效率和一致性要远优于手动有限稀释法。

机器分离的微球和细胞的平均分选效率和手动分离的对比.png

 图例:机器分离的微球和细胞的平均分选效率和手动分离的对比。


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