水产品中安眠酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB 31656.5-2021

安 眠酮（methaqualone）又称甲苯喹啉酮，系喹唑酮类衍生物，有镇静和催眠作用，在临床上常用作催眠剂、镇静剂。在动物运输过程中使用可减少动物的应激反应，降低动物的死亡率。安 眠酮作为可能会在水产动物运输过程中违规使用的禁用药物，为保障水产品质量安全，我国和欧盟均规定在动物食品中不得检出。

安谱实验根据2021年新国标GB 31656.5-2021《食品安全国家标准 水产品中安 眠酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，对鱼肉和虾肉进行测试，此方法回收率高，精密度好。

一、标准溶液配制

用50%甲醇水溶液配制成安 眠酮浓度分别为0.4、1、5、25、100 ng/mL，安 眠酮-D7浓度均为4 ng/mL的系列标准工作液，供液相色谱-串联质谱分析，现配现用。以安 眠酮和安 眠酮-D7峰面积比值为纵坐标，安 眠酮浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，求回归方程和相关系数。

二、提取

取搅碎后的试样约5 g（准确至±0.05 g）于50 mL离心管中，加200 ng/mL安 眠酮-D7工作液50 μL、水3 mL，涡旋混合30 s，加正己烷15 mL，振荡提取3 min，超声5 min，4500 r/min离心7 min.取正己烷层至25 mL容量瓶，残渣再加正己烷8 mL，重复提取一次，合并正己烷液，并用正己烷稀释定容至刻度，混匀，备用。

三、净化

小柱：CNWBOND Si硅胶 SPE小柱，货号SBEQ-CA1353，规格500 mg/ 3mL

活化：5 mL丙酮

平衡：5 mL正己烷

上样：10 mL备用液，速度每秒1滴

淋洗：5 mL 20%乙 醚-正己烷溶液，淋洗后抽干

洗脱：8 mL 50%乙 醚-正己烷溶液，洗脱后抽干

浓缩：收集洗脱液，40℃水浴氮气吹干，加50%甲醇溶液1.0 mL溶解残余物，经0.22 µm水相聚醚砜针式滤器滤过，供液相色谱-串联质谱测定。

四、LC-MS/MS测定

液相色谱条件

色谱柱：CNW C18液相色谱柱（2.1*150 mm，5 μm）

流动相：A：0.1%甲酸水；B：甲醇，梯度洗脱条件见表1；

表1 梯度洗脱条件

流速：0.3 mL/min

柱温：25℃

进样量：10 uL

质谱条件

离子源：ESI

扫描方式：正离子模式

检测方式：MRM

反吹干燥气：100

接口温度：320℃

雾化气：200

电离电压：4500 V

离子源温度：350℃

表2 母离子、子离子和碰撞参考质谱条件

五、实验谱图

1、标品谱图

2、鱼肉基质谱图

图2 鱼肉基质空白谱图

图3 鱼肉基质加标谱图

3、虾肉基质谱图

图4 虾肉基质空白谱图

图5 虾肉基质加标谱图

六、实验数据

1、标准曲线

图6 安 眠酮标准曲线

在0.4-100 ng/mL浓度范围内，内标法绘制标准曲线：

表3 线性回归方程

2、基质结果

表4 基质添加回收率和精密度

七、实验结论

内标法测试鱼肉和虾肉基质中的安 眠酮，基质中均未检测到，在5 μg/kg的添加浓度水平下，回收率为100%~110%，相对平均偏差<1.5%。

八、注意事项

1.移液枪移取甲醇、正己烷有机试剂时，体积不准确，在标准溶液配制和移取10 mL待净化液时需要采用合适的方式，比如气密针、移液管。

2.提取时应确保样品在水中得到很好的分散，如涡旋不开，可用玻璃棒搅拌。

3.取正己烷层时，如出现较厚的中间层或乳化层，则将样品重新震荡3 min，8000 r/min离心5 min，再取出正己烷层。