食用油专题 | （三）0.3%硝酸银硅胶小柱分离植物油中饱和烃矿物油和芳香烃矿物油

基质：植物油

样品提取：

称取2 g（准确至±20 mg）食用油样品于250mL带盖锥形瓶中，加入0.1mL（30-120ppm）9种混标，加入20 mL皂化液{氢氧化钾乙醇水溶液：16.8 g氢氧化钾溶于100 mL（乙醇：水=1：1）}，于70℃加热2 h，期间进行多次震荡，皂化直至油滴消失；取出后转移液体至分液漏斗，加入40 mL正己烷，室温下震摇5min，分层后去除下层水相，再加入50mL水，多次水洗至丢失的水相为中性，弃去水相，向分液漏斗加入适量的无水硫酸钠，将有机相转移至旋蒸瓶中，室温氮吹浓缩至1mL左右，待SPE净化。

SPE小柱操作：

SPE：CNWBOND 0.3%定制硝酸银硅胶 SPE 玻璃小柱（货号：SBEQ-CA13AA-glass）；

活化：15mL二氯甲烷

平衡：15mL正己烷

上样：1mL提取液

第一步洗脱（MOSH部分洗脱）：正己烷 6.5mL

第二步洗脱（MOAH部分洗脱）：二氯甲烷：正己烷（1：1）溶液 10mL

两步洗脱液分别收集，洗脱液在常温下氮吹浓缩至1.0 mL，上机检测。

加标样品：

称取样品后，加入 0.05mL石蜡油使用溶液（2000 μg/mL），加入 0.05mL多环芳烃使用溶液（20 μg/mL），后续操作同上。

备注：

9种混标溶液主要用作为定量内标、前处理方法考察和仪器性能考察；石蜡油和多环芳烃主要作为制备质控样加标使用；正构烷烃混标主要用作时间窗口确认。

前处理注意事项：

① 皂化操作完成后注意观察样品瓶中是否有油滴，需保障样品皂化完全；

② 注意控制氮吹温度和流速；

③ SPE小柱的洗脱条件可以根据具体样品的洗脱曲线进行调整，以保障矿物油的分离和回收；

④ 建议使用GC级正己烷（CBEQ-4-108708-4000）和二氯甲烷（CBEQ-4-103002-4000）溶剂；

⑤ 尽量避免塑料耗材使用，建议使用玻璃耗材，如玻璃巴斯德吸管。

3.1 气相色谱条件

气相色谱GC-FID

色谱柱：CD-5HT（30m*0.25mm*0.1um）（货号：GAEQ-621511）

流速：2.0mL/min

进样口：280℃，不分流进样，进样量：2μL

程序升温：50℃保持5min，以20℃/min升至350℃保持15min

FID检测器温度：350℃

3.2 标准溶液谱图

4.1 小柱洗脱曲线

9种混标中胆甾烷是饱和烃MOSH洗脱结束的标志，1,3,5-三叔丁基苯是芳香烃MOAH洗脱开始的标志，苝是芳香烃MOAH洗脱结束的标志。图4和图5分别是矿物油两步洗脱的洗脱趋势图，分析确认，建议矿物油分离MOSH部分需要6.5 mL正己烷洗脱，分离MOAH部分需要10 mL二氯甲烷：正己烷（1：1）溶液。

图4  0.3%硝酸银硅胶小柱MOSH部分洗脱趋势图

图5  0.3%硝酸银硅胶小柱MOAH部分洗脱趋势图

4.2 小柱加标回收率数据

9种混标在0.3%硝酸银硅胶小柱上的回收率数据见表2，十一烷、十三烷、双环己烷和胆甾烷在第一步洗脱回收，回收率在100%—120%之间；戊基苯、1-甲基萘、2-甲基萘、1,3,5－三叔丁基苯和苝在第二步洗脱回收，回收率在80%—110%左右。

表2 小柱加标9种内标的回收率数据

石蜡油和多环芳烃的加标回收率数据见表3，使用双环己烷为定量内标，计算十一烷和石蜡油的含量，回收率在85%—100%之间；使用2-甲基萘为定量内标，计算戊基苯和多环芳烃的含量，回收率在95%—125%之间。

表3 小柱加标石蜡油和多环芳烃的回收率数据

4.3 小柱加标样品谱图

图6 小柱加标样品－第一步洗脱

图7 小柱加标样品－第二步洗脱

4.4 植物油加标回收率数据

5种植物油中石蜡油和多环芳烃的加标回收率数据见表4和表5，5种植物油基质均有MOSH检出，检出量在10-70 mg/kg之间，使用双环己烷为定量内标，石蜡油的回收率在95%—135%之间；使用2-甲基萘为定量内标，多环芳烃的回收率在85%—110%之间。

表4 植物油中石蜡油的加标回收率数据

表5 植物油中多环芳烃的加标回收率数据

4.5 植物油样品谱图

使用CNWBOND 0.3% 硝酸银硅胶小柱（SBEQ-CA13AA-glass），可以实现植物油基质中饱和烃矿物油和芳香烃矿物油的分离，内标法计算回收率在85%—135%之间，该方法普适性较高，可满足食用油中矿物油的检测。针对不同植物油中的杂峰干扰，建议可根据“EN 16995:2017”，选择氧化铝硅胶小柱（SBEQ-CA13AO-glass）去除饱和烃部分的长链正构烷烃干扰，选择环氧化试剂（间氯过氧化苯甲酸）进行环氧化反应去除芳香烃部分的烯烃、角鲨烯、甾烯、胡萝卜素等物质干扰。