食品中氯丙醇含量测定的整体解决方案—— GB 5009.191-2024 第一篇

4种氯丙醇及其内标的信息见表1：

表1 目标物信息

氯丙醇混合标准中间溶液（10 μg/mL）：取0.1 mL 1000 ppm 4种氯丙醇混标溶液（货号：CDAA-M-200252-FD-1.2ml），用正己烷溶剂定容至10 mL。于-20 ℃下保存，保存期为 6个月。

氯丙醇混合标准工作溶液（1 μg/mL）：取1 mL 10ppm 4种氯丙醇混标，用正己烷溶剂定容至10mL。临用现配。

氘代氯丙醇混合标准工作液（10 μg/mL）：取1mL 100 ppm 4种氯丙醇内标混标溶液（货号：CDAA-M-200271-FA-1.2ml），正己烷定容至10 mL。得到4种氘代氯丙醇混合标准工作液。于-20 ℃下保存，保存期为 6个月。

按照表2进行标准曲线的配制，临用现配。

表2 氯丙醇标准曲线配制

样品前处理：

基质样品：婴幼儿配方奶粉。

提取：

称取试样4 g（精确到0.01 g）于50 mL塑料离心管中，准确加入混合内标工作液（10.0 μg/mL）20 μL，加入8 mL 20%氯化钠溶液，涡旋1 min后，超声10 min，于4 ℃下以10 000 r/min的转速离心10 min，扎破上层薄膜后小心取出上清液于玻璃试管中，再加入8 mL 20%氯化钠溶液重复提取操作1次，合并上清液，取8 mL待净化。

净化：

将待净化液转移至玻璃硅藻土小柱中，待样品全部浸润于填料中，放置10 min。用10 mL正己烷淋洗，弃去淋洗液，然后用15 mL乙酸乙酯洗脱，玻璃试管收集洗脱液。在洗脱液中加入5 g无水硫酸钠，不断振摇脱水，放置不少于30 min后过滤，转移滤液至密闭性良好的带盖玻璃管中，于40 ℃下氮吹浓缩至0.5 mL（切忌浓缩至干），加入2.00 mL正己烷，涡旋混合，待衍生化。

衍生化：

于标准系列溶液和上述净化液中用气密针快速加入0.05 mL七氟丁酰基咪唑，立即密封，涡旋混合30 s，放置烘箱中，于70 ℃下保温20 min。衍生结束后，取出冷却至室温，加入2 mL 20%氯化钠溶液，涡旋1 min，使水相和正己烷分层，且水相澄清。取上层正己烷相，加入约0.3 g无水硫酸钠吸水干燥，过0.22μm 疏水PTFE滤器，将溶液转移至进样瓶中，供上机测定。

加标样品：

加标水平25 μg/kg（对应上机溶液浓度50ng）：称取样品后，加入氯丙醇混合标准工作溶液（1μg/mL） 0.1mL，后续操作同上；

加标水平200 μg/kg（对应上机溶液浓度400ng）：称取样品后，加入氯丙醇混合标准中间溶液（10μg/mL） 0.08mL，后续操作同上；

前处理注意事项：

1、前处理过程中尽量避免试样塑料耗材，可使用玻璃巴斯德吸管、玻璃移液管、手动进样针等耗材，建议进行方法空白实验监控过程本底情况；

2、硅藻土小柱使用时，待净化液应全部浸没在填料上，而不能穿透，底部最好有少量的填料保持干燥，本实验参照标准要求取8mL提取液进行过柱净化，可满足实验需求，但如仪器灵敏度较好，在满足标准的前提下，建议可以取4mL提取液进行过柱，以保证更好的净化效果；

3、本方法为同位素内标法进行定量，氘代氯丙醇能够对氯丙醇的回收情况进行校正，氯丙醇外标的绝对回收率可能会因为不同基质导致相对较差，如需提高绝对回收率可增加乙酸乙酯的洗脱体积至25mL；

4、七氟丁酰基咪唑易吸水，建议低温干燥保存（可放于含有干燥剂的袋子中然后置于冰箱保存），建议临用前从冰箱拿出；

5、衍生反应需在密闭性良好的带盖玻璃管中进行，建议使用顶空瓶进行；

6、尼龙滤器容易检出本底，建议使用疏水性PTFE针式滤器进行过滤。

气相色谱-质谱联用仪

色谱柱：毛细管气相色谱柱CD-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）

进样量：2 μL

进样口温度：250℃，不分流进样

载气：氦气，

色谱柱流速：1.0 mL/min

升温程序：初始温度50 ℃保持1 min，2 ℃/min升至90 ℃，以20 ℃/min升至300 ℃保持5 min。

传输线温度：280℃    离子源温度：280℃

离子化能量：70 eV     溶剂延迟时间：5 min

扫描模式：选择离子监测SIM模式，离子对信息见表3。

表3 目标物离子对信息

5.1 标准曲线数据

以标准品与内标的质量为横坐标，目标物与其对应内标的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。4种氯丙醇化合物的标准曲线和线性相关系数见下表。

表4  3-MCPD、2-MCPD、1,3-DCP、2,3-DCP标准曲线

5.2 加标回收率数据

婴幼儿配方奶粉样品的加标回收率数据见下表。

表5 奶粉基质的加标回收率数据（n=3）

使用标准品和相关耗材，参照国标《GB 5009.191-2024 食品安全国家标准 食品中氯丙醇及其脂肪酸乙酯、缩水甘油酯的测定》第一篇，对于婴幼儿配方奶粉样品中1,3-二氯-２-丙醇、2,3-二氯-1-丙醇、2-氯-1,3-丙二醇和3-氯-1,2-丙二醇进行检测，加标回收率在80%-110%以上，RSD均小于5%，该方法操作简便稳定。标准品和相关耗材能够很好的满足奶粉基质中氯丙醇含量的检测。