动物食品中地西 泮及安眠 酮的检测-赛默飞气相色谱-质谱法

【概述】

地西 泮(diazepam)、安眠 酮(methaqualone)在临床上作为镇静催眠药，属于精神管制药,长期服用有成瘾性和依赖性。

近年来,随着畜牧养殖业的发展,有不法分子在经济利益的驱动下,擅自在畜禽饲养中添加使用以期增加产肉量。地西 泮、安眠 酮在饲料中的滥用,将Z终导致畜产品中药物的残留,从而严重影响消费者的身体健康[1]。

地西 泮、安眠 酮的测定方法多集中在临床制药和刑侦检测方面,如血液、尿液、胃内容物等。主要有紫外分光光度法检测;液液提取,用HPLC分析;固相萃取,GC-FID或GC-MS测定;用薄层层析分离定性,用薄层扫描测定含量[1～3]。

【实验/设备条件】

色谱柱：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25μm）；

柱温：150℃（1 min），10℃/min到290℃（4 min）；

进样模式：不分流进样；进样量：1 µL，分流时间1 min；

进样口温度：290℃（15 min）；

载气：氦气（99.999%），恒流模式，1 mL/min；

质谱离子源温度：310℃，传输线温度：290℃；

扫描模式：选择离子监测模式，每个离子驻留时间0.09 s，

地西 泮：283,256*,241,221；安眠 酮：250, 235*, 217,91；

【样品提取】

提取

取适量新鲜的猪肉样品，用匀浆机绞碎，并使均质。取均质后的供试样品，作为供试材料，空白样品作为空白试料；均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为加标回收材料。

称取试料约1.0 g(极ng确到0.01 g)，于15 ml离心管中，加入10 ml乙腈，涡旋后水浴超声5 min，8000 r/min离心10 min，取上清液于50 ml离心管中，加入30 ml正己烷，涡旋混匀后静置，弃上层液。取下层液，于50℃氮气吹至1 ml，加水4 ml，混匀备用。

净化

C18柱依次用甲醇5 mL和水5 mL活化，取备用液过柱，用50%甲醇水溶液5 mL淋洗，用70%甲醇水溶液5 mL洗脱，收集洗脱液，于50℃氮气吹干，用200μl甲醇复溶，待测。

【实验/操作方法】

本方法是将样品中的地西 泮和安眠 酮用乙腈提取，固相萃取的方法净化后用气相色谱-质谱进行定性、定量。该方法定量准确，灵敏度高，重现性好，能够满足目前动物性食品中地西 泮和安眠 酮检测的需要。

【实验结果/结论】

仪器分析方法优化：以全扫描的方式对目标物标液进行测定，得到其质谱图，根据全扫描质谱图经NIST谱库检索进一步确证目标化合物，得到其保留时间，选择合适的定性和定量的特征目标监测离子。测定时，可根据标准物和待测物的定量离子图中的峰面积，外标法定量。确证时，可根据碎片离子及其丰度比作为其阳性判别的依据。在选定的色谱条件下，标准品的色谱图见图1。

图 1.由上至下分别为甲醇空白、10 ng/ml标准溶液及基质空白的提取离子图

线性关系及测定低限：将0.5、1、5、10、50、100、500和1000 ng/ml的系列标准工作液由低浓度到高浓度进样。

以测定峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线如图2，表1.。分别将样品前处理项下的加标回收样品，按照样品前处理步骤处理，所得的溶液进样即得各组分的加标回收率，具体见表2、表3.。本实验方法检出限以3倍信噪比计算得到，本方法测定猪肉中安眠 酮和地西 泮的的测定低限为1.0 µg/kg。

图2.安眠 酮（左）和地西 泮（右）的标准曲线

表1.标准曲线结果

表2.安眠 酮的加标回收率（n=5）

表3.地西 泮的加标回收率（n=5，本底检出38.55ng/ml）

图3.由上至下分别为低、中、高浓度的加标回收率谱图

回收率及精密度实验：用标准添加法，在均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为加标回收材料。按上述方法进行提取、净化和测定，猪肉样品中各目标物的添加浓度均为 10 ng/ml、50 ng/ml和100 ng/ml 三个水平，每个浓度点平行 5 份，各添加谱图见图3，低浓度（10 ng/ml）各组分选择离子质谱图和标样质谱图见图4，5.。由图4和图5的对比可以看出尽管在低浓度地西 泮周围杂峰较多，但是其离子比例仍然与标样接近，符合定性要求。回收率具体结果见表2、3.。

图4. SIM模式下标准溶液10 ng/ml的质谱图

图5. SIM模式下加标回收率溶液10 ng/ml的质谱图

结论

本实验参考食品安全国家标准GB29697-2013,采用气质联用检测猪肉组织中的地西 泮和安眠 酮，方法灵敏，结果可靠，可以为动物食品中的地西 泮和安眠 酮的检测提供参考。

【仪器/耗材清单】

仪器

Trace1310-ISQ气相色谱质谱联用仪，配EI源（ThermoScientific）；

AS1310自动进样器（Thermo Scientific）

恒温水浴锅、离心机、天平、漩涡混合器、氮吹仪、固相萃取仪（Thermo Scientific）。

耗材

色谱柱：TG-5SilMS（30 m×0.25 mm×0.25μm）（Thermo Scientific,PN: 26096-1421）C18 SPE柱，500 mg，3mL（Thermo Scientific）

试剂与标准品

地西 泮和安眠 酮标准储备溶液：浓度200μg/ml；

正己烷、乙腈、甲醇：色谱纯(Thermofisher)。

【参考文献】

[1]汤文利，任爱丽，梁萌，陈淑沂.GX液相色谱法同时测定饲料中地西 泮、安眠 酮的含量.家禽科学.2006，07 : 11-13

[2]葛明伟，陈莹莹，王淑芬.饲料中安定GX液相色谱分析方法研究.辽宁畜牧兽医.1996(增刊)：47-49

[3]员克明，李贵明，王英元，安健康.安眠 酮薄层色谱扫描检测研究.ZG法医学杂志，1997, 12（1）：25-27