核苷修饰:IVT mRNA 药物安全有效的关键因素
2024-04-3090关注我们,更多干货和惊喜好礼
胡金胜 熊亮
引 言
2023 年,Katalin Karikó 和 Drew Weissman 因在 mRNA 核苷碱基修饰方面重要的基础性发现而荣获诺贝尔生理学或医学奖,这一发现使得开发出针对 COVID-19 的有效 mRNA 疫苗成为了可能[1]。在 mRNA 体外转录 (In Vitro Transcription, IVT) 时掺入修饰的核苷, 如假尿苷 (Ψ)、N1-甲基假尿苷 (m1Ψ) 等, 可以降低其免疫原性、增强稳定性并提高产出。IVT mRNA 的核苷修饰已有广泛研究, 如核苷修饰的 COVID-19 mRNA 疫苗在较早之前已得到紧急使用授权[2]。近期,核苷修饰在 mRNA 体外转录工艺流程中的安全性和有效性引发了行业内外的高度关注。
理论基础
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图 1 mRNA 体外转录 (IVT) 流程图[6]
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前沿动态
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图 2 从尿苷 (U) 到假尿苷 (Ψ) 异构化及进一步甲基化的示意图[8](点击查看大图)
目前,通过测定起始物料和反应底物中核苷 (Nucleosides) 及核苷三磷酸 (NTPs) 的含量,可以用来判定反应进行的程度,全程监控 mRNA 体外转录反应的过程,也可以用于优化起始物料的配比,为后续工艺改进提供思路。例如,使用低稳态水平的 UTP,可以减少体外转录过程中 dsRNA 副产物的形成[10];采用阴离子交换 HPLC 监测 mRNA 体外转录反应,支持 mRNA 生产工艺开发[11]。
赛默飞应用解决方案
01
Acclaim C30 应用于尿苷、假尿苷和 N1-甲基假尿苷的分离
1.1
仪器配置及色谱条件
液相色谱仪:Vanquish? Core HPLC 液相色谱系统,配置:泵 Quaternary Pump C,自动进样器 Split Sampler CT,柱温箱 Column Compartment C,检测器 Diode Array Detector C,数据处理 Chromeleon? 7.3
色谱柱:Acclaim C30, 3 μm, 2.1×250 mm (P/N: 078664)
流动相、流速及洗脱程序:详见应用解决方案
进样量:5 μL;样品盘温度:15 ℃
柱温:40 ℃
采集波长:260 nm;采集频率:10 Hz;
光谱采集:190-400 nm
1.2
分离谱图及数据
图 3 对照品溶液、供试品溶液叠加谱图
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02
Acclaim C30 应用于 N1-甲基假尿苷及其含磷衍生物的分离
2.1
仪器配置及色谱条件
液相色谱仪:Vanquish? Core HPLC 液相色谱系统,配置:泵 Quaternary Pump C,自动进样器 Split Sampler CT,柱温箱 Column Compartment C,检测器 Diode Array Detector C,数据处理 Chromeleon? 7.3
色谱柱:Acclaim C30, 3 μm, 2.1×250 mm (P/N: 078664)
流动相、流速及洗脱程序:详见应用解决方案
进样量:2 μL;样品盘温度:15 ℃
柱温:15 ℃
采集波长:260 nm;采集频率:10 Hz;
光谱采集:190-400 nm
2.2
分离谱图及数据
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03
关于 Acclaim C30 色谱柱[12]
3.1
Acclaim C30 可耐受 100% 水相,耐受 pH 范围为 2-8,耐受温度上限为 60 ℃
3.2
Acclaim C30, 3 μm, 2.1×250 mm 耐受压力上限为 10000 psi,推荐流速 0.2–0.3 mL/min
Tips
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参考文献:
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