玉米粉中玉米赤霉烯酮含量的免 疫亲和柱法（Copure® 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱）

一、样品提取 

称取 5.00 g（精确到 0.01 g）玉米粉到 50 mL 离心管，加入 1.0 g NaCl 和 20 mL 70% 甲醇水溶液，振荡 30 min，4000  r/min 下离心 5 min，取上清液 1 mL 于 15 mL 离心管中，加 水 4 mL，混匀待净化。 

二、免疫亲和柱净化（Copure® 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱， 3 mL） 

上样：将 20 mL 上样器连接于免疫亲和柱上端，取待净化样品 1 mL 以 1-2 滴 / 秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。 

淋洗和洗脱：加入 20 mL 水淋洗柱子，分两次淋洗，弃掉流 出的液体；抽干小柱；加入 3 mL 甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速 约为 2-3 秒 / 滴。 

重新溶解：50℃下氮吹至近干，加 1 mL 50% 乙腈水溶液溶解， 0.22 µm 滤膜过滤，供 HPLC 分析。 

三、仪器条件 设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：Inertsustain C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 

检测器：Waters 2475 荧光检测器 检测波长：激发波长：274 nm 发射波长：440 nm 流动相：A：乙腈 B：水 C：甲醇 洗脱方式：等度洗脱，A：B：C=46：46：8 流速：1 mL/min 进样体积：20 µL 

四、实验结果 

表 1 1.0 mg/kg 玉米粉中玉米赤霉烯酮的添加回收结果