用Feyond-A500多功能酶标仪进行Transcreener荧光偏振测定

所有测定的试剂是与高特异性单克隆/多克隆抗体结合的远红外示踪剂。酶反应产生二磷酸核苷酸或单磷酸核苷酸，将抗体-淬灭剂偶联物中的示踪剂置换下来。由于示踪剂的旋转自由度增加，导致极化降低。

配制10μM ATP/ADP标准曲线，以这类标准曲线模拟酶反应。从10μM ATP开始，ADP的添加量增加，ATP按比例减少，总腺嘌呤核苷酸浓度保持在10μM。需要在10μM ATP转化率为10%时，Z’>0.7和ΔmP>120。

·Feyond-A500多功能酶标仪（）

·Transcreener? ADP2 FP Assay（货号：3010-1K）

·缓冲溶液中的 ATP/ADP 混合物( 恒定的腺嘌呤浓度10μM )

·Corning全黑酶标板96孔板荧光检测板（货号：3915）

表1  ADP/ATP标曲配制（10μM母液 ）

表2  仪器参数设置

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随着ADP：ATP比例增加，结合示踪剂与游离示踪剂的比例降低，导致mP值整体下降。在Feyond-A500酶标仪上读取标品点。

A：在模拟10μM ATP转化为ADP的标准曲线中观察到的Z'和ΔmP值。

B：标准曲线0-2.5μM ADP部分放大图显示，Z'验证最小合格数据(蓝色虚线)和ΔmP验证最小合格数据(红色虚线)。10% ATP转换验证点(垂直黑色虚线)。

Feyond-A500多功能酶标仪通过了Transcreener ADP² FP测定的验证标准。基于滤光片的测量结果Z’值为0.79（标准：在10 μM ATP下10%转化率时Z’值>0.70），ΔmP的测量结果为140（标准：在10 μM ATP下10%转化率时ΔmP>120 mP）。