用Feyond-A500多功能酶标仪进行Transcreener荧光偏振测定
Transcreener技术是一种基于核苷酸检测的通用高通量生化检测平台。该测定法是基于二磷酸核苷酸(ADP/GDP) 的检测，二磷酸核苷酸可由数千种激酶催化而形成，其中许多酶催化共价调节反应，这些反应是细胞信号传导的核心，在药物发现中具有重要价值。
原 理
所有测定的试剂是与高特异性单克隆/多克隆抗体结合的远红外示踪剂。酶反应产生二磷酸核苷酸或单磷酸核苷酸，将抗体-淬灭剂偶联物中的示踪剂置换下来。由于示踪剂的旋转自由度增加，导致极化降低。
验证标准
配制10μM ATP/ADP标准曲线，以这类标准曲线模拟酶反应。从10μM ATP开始，ADP的添加量增加，ATP按比例减少，总腺嘌呤核苷酸浓度保持在10μM。需要在10μM ATP转化率为10%时，Z’>0.7和ΔmP>120。
材料与方法
·Feyond-A500多功能酶标仪（）
·Transcreener? ADP2 FP Assay（货号：3010-1K）
·缓冲溶液中的 ATP/ADP 混合物( 恒定的腺嘌呤浓度10μM )
·Corning全黑酶标板96孔板荧光检测板（货号：3915）
表1 ADP/ATP标曲配制（10μM母液 ）
% 浓度 | ATP | ADP |
100 | 0 | 100 |
75 | 25 | 75 |
50 | 50 | 50 |
25 | 75 | 25 |
15 | 85 | 15 |
10 | 90 | 10 |
7.5 | 92.5 | 7.5 |
5 | 95 | 5 |
3 | 97 | 3 |
2 | 98 | 2 |
1 | 99 | 1 |
0 | 100 | 0 |
表2 仪器参数设置
模式 | 荧光偏振 |
激发波长 EX | 624-40 nm |
发射波长 EM | 692-40 nm |
G-factor | 1.06 |
次数 | 150 |
增益 | 自动增益 |
积分时间 | 40 μs |
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结 果
随着ADP：ATP比例增加，结合示踪剂与游离示踪剂的比例降低，导致mP值整体下降。在Feyond-A500酶标仪上读取标品点。
A：在模拟10μM ATP转化为ADP的标准曲线中观察到的Z'和ΔmP值。
B：标准曲线0-2.5μM ADP部分放大图显示，Z'验证最小合格数据(蓝色虚线)和ΔmP验证最小合格数据(红色虚线)。10% ATP转换验证点(垂直黑色虚线)。
结 论
Feyond-A500多功能酶标仪通过了Transcreener ADP2 FP测定的验证标准。基于滤光片的测量结果Z’值为0.79（标准：在10 μM ATP下10%转化率时Z’值>0.70），ΔmP的测量结果为140（标准：在10 μM ATP下10%转化率时ΔmP>120 mP）。
关于奥盛
奥盛定位生命科学工具提供商，专注生命科学检测设备及自动化解决方案。公司围绕生物样品核酸蛋白纯化、自动化工作站，生物吸收光、荧光及发光检测三大技术平台，在生命科学领域进行了深度布局。
目前，公司拥有省级高新技术企业研究院，是2022年第一批浙江省”专精特新”中小企业。
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