猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV）试剂盒使用说明书

猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中流行性腹泻病毒抗体（PEDV）水平 实验原理： 本试剂盒采用双抗原夹心法测定血清或血浆中猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV）用纯化的猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV）抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中流行性腹泻病毒抗体（PEDV）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的流行性腹泻病毒抗体（PEDV）抗原结合，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中猪流行性腹泻病毒抗体（PEDV）的存在与否 试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8保存 阴性对照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8保存 阳性对照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8保存 酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8保存 浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心胸腹水脑脊液参照实行 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成，应再次离心 5. 组织标本：切割标本后，称取重量加入一定量的PBS，PH7.4用液氮迅速冷冻保存备用标本融化后仍然保持2-8的温度加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清分装后一份待检测，其余冷冻备用 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性