快速菌膜鉴定，真的可以尝试吗？
2024-07-02265为了缩短鉴定时间，快速提供临床可信赖的结果，在以“为所有脓毒症患者提供48小时内最低抑菌浓度药敏结果”为目标的脓毒症全流程解决方案中，MALDI-TOF MS是实现快速鉴定分级报告的重要环节。针对阳性血培养进行快速质谱鉴定能够进一步免去隔夜传代培养时间，从而加速报告。因此，阳性血培养的快速鉴定方法成为大多数实验室关注的焦点。
2019年，欧洲临床微生物学和传染病学会（ESCMID）发起了一项基于微生物实验室血培养流程的现状调研，其中37.3%（78/209）的实验室进行了血培养菌膜的快速鉴定。
本文分享了三篇应用VITEK MS的研究，研究从固体培养基上挑选短时孵育（从常规的16-24小时孵育缩短到4-8小时）的菌膜进行直接鉴定。相较于直接从阳性血培养物中提取鉴定细菌，这种方法操作更加方便，并且减少了肉汤培养基和血液对鉴定结果的干扰因素。
文献一
VITEK MS短时孵育3h、5h的鉴定成功率[1]
意大利都灵大学医学院共入组了162例单微生物血液培养物，其中121例为革兰氏阴性菌株（占74.7%），32例为革兰氏阳性菌株（占19.8%），以及9例酵母菌株（占5.6%）。研究发现，质谱在种水平鉴定上的准确性与传统方法相比，在3小时、5小时和24小时的时间点分别达到60.5%、80.2%和93.8%的一致性。
对于革兰氏阴性菌，肠杆菌科的鉴定率最高；对于革兰氏阳性球菌，金黄色葡萄球菌的鉴定结果最好（鉴定成功率为100%）。此外，研究发现，凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）在培养5小时后就获得了良好的鉴定结果（鉴定成功率为88.2%），且没有被误认为金黄色葡萄球菌，这无疑是快速区分真正的病原体及可能的污染的有效方法。
然而，在一篇关于某国际进口品牌B评估的文章中，研究对435个单微生物培养物进行了快速鉴定。结果显示，在传代短时孵育5小时后，金黄色葡萄球菌的鉴定成功率为79.5%，而凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）的鉴定成功率为53.8%[2]。
VITEK MS从建库菌株的多样性出发，同时考虑操作人员和培养条件的差异，采用权重矩阵算法构建准确数据库。这是目前唯一能够提供单一临床诊断结果的平台，无需在多个鉴定结果中进行选择，从而将报告结果错误的风险降至最低。该平台可以为临床提供准确且快速的二级鉴定报告。
文献二
VITEK MS短时孵育6h、8h的鉴定成功率[3]
芝加哥大学医学院共收集了134例血培养阳性样本，这些样本被直接转种至预热1小时的血平板，并在培养2、4、6、8、10小时后进行评估，无需进行乙醇-甲酸蛋白质提取。研究发现，在培养4小时后，阴性菌的正确鉴定率达到94%；在培养6小时后，阳性菌的正确鉴定率达到98%。
总体上，培养6小时后的总鉴定成功率超过90%；培养8小时后，总鉴定成功率达到95%。
文献三
VITEK MS PRIME
短时孵育3-4h菌膜鉴定成功率[4]
VITEK MS PRIME是2024年新上市的质谱系列产品，完全延续了VITEK? MS在数据库和算法上的可靠性，同时改善了操作流程的体验感。实验室可随时加载靶板并调整检测优先级，最多支持16张靶板同时在线，可在实验室任意电脑上进行信息录入及结果查看，将人在设备面前的等待时间降至零，优化了鉴定流程。该系统更高效地实现了与LIS分级报告及VITEK 2药敏流程的对接，从而节省人力、提升TAT（周转时间），并支持临床更早从经验治疗转向目标治疗。
一项纳入218株菌的临床实验数据显示，VITEK MS PRIME在3-4小时培养（菌膜）后的鉴定成功率高达70.2%，而某国际进口品牌B的成功率为55.5%。
准确且快速的二级鉴定报告的发出，必须基于一个稳定且可靠的数据库，并配合信息化的全流程溯源，才能真正助力微生物实验室在血流感染患者中的抗菌药物治疗。需要注意的是，在使用菌膜进行二级报告鉴定前需进行性能验证，对于无法通过此方法识别的微生物（例如，血培养混合感染样本、革兰氏阳性杆菌、厌氧菌及酵母菌等），仍需通过过夜培养以获得成熟菌落进行识别。
目前，国内已有多家实验室实现了鉴定时间少于32小时的二级报告。中国科学技术大学附属医院评估并比较了使用VITEK MS进行的快速微生物鉴定与常规微生物鉴定对血流感染住院患者抗生素使用、临床结局和卫生经济学的影响。研究显示，引入VITEK MS后，从入院到首次目标性抗生素治疗的时间缩短了28.7小时（p<0.001），平均住院时间缩短了5.9天（p<0.001），平均节省抗生素费用7300元（1021美元）（p<0.001），平均住院费用节省24078元（3368美元）（p<0.001）。该研究内容也发表在2024年ECCMID（Poster NO：P0874）。
参考文献：
[1] Curtoni A, Cipriani R, Marra ES, Barbui AM, Cavallo R, Costa C. Rapid Identification of Microorganisms from Positive Blood Culture by MALDI-TOF MS After Short-Term Incubation on Solid Medium. Curr Microbiol. 2017;74(1):97-102.
[2] Pranada AB, Cordovana M, Meyer M, et al. Identification of micro-organism from positive blood cultures: comparison of three different short culturing methods to the Rapid Sepsityper workflow. J Med Microbiol. 2022;71(8):10.1099
[3] Bhatti MM, Boonlayangoor S, Beavis KG, Tesic V. Rapid identification of positive blood cultures by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry using prewarmed agar plates. J Clin Microbiol. 2014;52(12):4334-4338.
[4] Grohs P, Remaud E, Lath C, et al. Comparison of the New VITEK MS PRIME System with the Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Biotyper Microflex LT for the Identification of Microorganisms. Ann Lab Med. 2023;43(6):574-584.
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