是谁的PCR实验又失败了？

2023-10-132463

PCR实验又失败了

时间：周五下午

坐标：实验室

认真点完96孔板的你，贴上封板膜，放入PCR仪，跑完4小时的程序后准备美美下班。看了一眼数据，再看一眼PCR板——

你（瞳孔地震）：“师兄！跑完PCR，边缘孔的液体体积怎么看起来少了？”

你师兄（仔细观察）：“把‘看起来’去掉。”

原来是因为......

实验室前辈们总结出了影响PCR的n大要素，反应步骤、引物设计……PCR板的选择往往是Z容易被忽视的，但同样至关重要。

划重点：PCR板的选择，你避坑了吗？

1. 污染源

从核酸提取开始到后续目的片段定向扩增，都要在无DNase与RNase、无PCR抑制剂的环境中进行，否则这些污染物会大大降低扩增效率。这是PCR耗材的基本要求，质量的关键取决于生产环境的洁净度和工艺质控。

2. 硬度

硬质框架PCR板比普通PCR板有更高的硬度，不会出现“翘边”的现象，在贴膜的时候方便对每个孔“雨露均沾”，达到良好的密封性。

3. 蒸发率

PCR实验在小体系（微升级别）中反应，且程序包含温度的循环升降，这些都容易造成体系蒸发的边缘效应，影响产物浓度。因此PCR板需搭配高质量的封板膜，降低体系蒸发率，确保Z终数据的可靠性。

4小时PCR后的剩余体积 (初始体积-20ul)

4. 荧光转化率

PCR孔壁经特殊设计的二氧化钛着色工艺，能优化荧光定量PCR (qRCR) 反应的荧光信号反射效率，减少孔间信号交叉污染。相较于透明的PCR耗材，白色PCR板和PCR管的孔壁能更灵敏地反射荧光信号，优化实验结果。

特殊着色工艺的白色PCR耗材优化荧光信号结果

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