绿色荧光蛋白嵌合体小鼠的建立和鉴定

绿色荧光蛋白嵌合体小鼠的建立和鉴定 1 材料与方法 111 材料 11111 实验动物和细胞系 ES2D3 细胞系, 昆明小鼠由中山大学实验动物ZX提供; 小鼠胚胎呈纤维细胞(MEF) 取自孕1215 d 昆明小鼠胚胎 11112 实验试剂 绿色荧光蛋白真核表达质粒p EGFP2N1 (N1 末端改进型荧光蛋白载体) 为Clontech公司产品;Lipofectin转染试剂盒购自GBICO 公司, Bam H 限制性内切酶试剂盒(目录号MR0521)RNaseA购自华美生物工程公司,DL15000Markers 试剂盒购自大连宝生物公司;DMEM 培养基和L IF购自GBICO公司胎牛血清购自杭州四季青公司; 胰酶M16 M2 培养液购自SIGMA 公司 112 方法 11211 ES2D32GFP 细胞的建立和培养采用脂质体介导法用质粒p EGFP2N1(N末端改进型荧光蛋白载体Clontech 公司) 转染ES2D3 细胞将10 l质粒p EGFP2N1Lipofectin分别溶于100l 80l 无血清DMEM 培养基中, 混合后加入800l 无血清DMEM 培养基混匀, 滴加至ES2D3 细胞上, 加入转染液后于375%CO2 培养箱内5 h 弃转染液, 换ES 培养液继续培养(培养液为葡萄糖含量4 500 mg/ L 的DMEM 添加20%FBS2巯基乙醇011 mmol/ L L IF 1 000 IU/ ml青霉素100IU/ ml 链霉素100IU/ml) 48 h 后消化接种至经MMC 处理过的MEF 上, 继续培养24 h 后, 用浓度为300g/ ml G418的ES细胞培养液筛选抗性克隆, 倒置荧光显微镜下挑取荧光Z强的克隆, 命名为ES2D32GFP 细胞, 进行扩增培养 2 结果 荧光蛋白观察镜 荧光蛋白激发光源 荧光蛋白观察镜(无激发光源） 荧光蛋白观察镜 荧光蛋白滤光片