【微课堂】酶底物法大肠菌群检测试剂质量控制

酶底物法大肠菌群检测的原理是试剂被受测水样溶解后，水样中的总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌在特定温度下培养特定的时间能产生β-半乳糖苷酶，将选择性培养基中的无色底物邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）分解为黄色的邻硝基苯酚（ONP）；大肠埃希氏菌同时又能产生β-葡萄糖醛酸酶，将选择性培养基中的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）分解为4-甲基伞形酮，在紫外灯照射下产生荧光。

上述结果的判读很大程度上取决于试剂的性能，因此我们对酶底物法大肠菌群检测试剂质量控制尤为重要。

HJ 1001-2018《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》中提及了酶底物大肠菌群检测试剂的质量控制要求。

图1：HJ 1001-2018《水质 总大肠菌群、粪大肠菌群

和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法》中

酶底物大肠菌群检测试剂的质量控制要求

将于≤-18℃冷冻保存的酶底物法大肠菌群检测质控菌株取出后，置于室温下平衡5 min-10 min，而后在无菌环境中将菌株加入到100mL无菌水中，摇动10s-20s混合均匀。

注：溶解后的质控菌株需在10 min内完成测试。

向溶解了菌株的100mL水样中，添加酶底物法大肠菌群检测试剂，手动混匀至酶底物法大肠菌群检测试剂充分溶解，然后按规定直接培养或装入51/97孔定量盘封口后培养24h。

图3：酶底物法大肠菌群酶底物试剂添加与培养

使用100mL无菌水溶解酶底物法大肠菌群检测试剂后，按规定直接培养或装入51/97孔定量盘封口后培养24h，结果应均为阴性。

图4：100mL无菌水实验结果为阴性

按规定直接培养24小时后进行结果判读，如果结果可疑，可延长培养至28 h 进行结果判读，也可以使用酶底物法微生物自动计数仪自动判定结果，实验结果应符合下表。

注：如检测项目仅为总大肠菌群，质量控制时可不检查是否有荧光。

表3：酶底物法大肠菌群检测试剂质量控制培养结果

如酶底物试剂未能符合质量控制要求，建议复试一次，避免微生物污染或加菌量偏差导致结果出现异常；复试未通过，建议停止使用该批次的酶底物大肠菌群检测试剂，并和供应商联系。