SCIEX微量基因毒杂质分析方案：NDSRI类亚硝胺杂质的质谱精准定量
2024-09-0569何谓NDSRIs
(Nitrosamine drug substance-related impurities)
与单纯亚硝胺杂质不同，NDSRIs类杂质指的是那些药物分子本身参与亚硝胺杂质形成的类型。这些药物中通常都含有二级胺（包括叔胺）结构，为亚硝胺的形成提供了氨基单元。相对于NDMA和NDEA这样的单纯亚硝胺杂质，NDSRI类亚硝胺杂质的上限值被指定得非常低。
分析挑战
为这些新发现的 NDSRI类亚硝胺杂质建立合适的特异性和高灵敏度分析方法也是一项重大挑战。对于最大日剂量(MDD) > 2000 mg/天，且ADI 为 18 ng/天的药品，亚硝胺杂质的浓度限值应为0.009 ppm 或 9 ppb。EMA要求杂质的限值应小于ADI的10%，相当于0.9 ppb。如此低的限度值对仪器灵敏度和方法的稳定性提出了巨大的挑战。
面对NDSRI类亚硝胺杂质的具体分析挑战，分别开发出了三重四极杆高灵敏度和QTOF高特异性的定量方案。
方案一：本土化 Triple Quad? 4500系统测定依那普利中的N-亚硝基依那普利
方案特点：
建立7 min 色谱梯度，实现高通量定量分析；
方法灵敏度高（定量下限LOQ: 0.02 ng/mL，相当于5 mg/mL原料药中的含量为4 μg/kg）；标准溶液线性范围宽（ 0.02～ 100 ng/mL，5000倍线性范围）；
两个不同浓度的提取回收率在103-112%之间，满足要求；
图1. 典型色谱图（从左到右，分别为空白溶剂、 0.02 ng/mL和100 ng/mL标准溶液）
图2. 不同浓度点峰面积、保留时间及RSD结果
方案二：本土化 QTRAP系统分析伏诺拉生制剂中亚硝胺类基因毒性杂质
方案特点：
开发并验证了一种分析伏诺拉生片中基因毒杂志NPV(N-硝基伏诺拉生)的方法，可准确的测定该药物中痕量的NPV杂质含量。
使用 QTRAP系统，利用离子阱功能同时定性定量分析，发现新的可能杂质。
图3. 标准品，富马酸伏诺拉生原料药，各浓度加标样本提取离子色谱图
图4. MRM-IDA-EPI分析结果解析
方案三：高分辨质谱X500R系统 MRM??对雷沙吉兰制剂中亚硝胺类杂质N-亚硝基雷沙吉兰定量分析
方案特点：
QTOF高分辨质谱系统具有高扫描速度，同时能兼顾高灵敏度和高分辨率，保证数据的高质量和准确度。
MRM??采集模式获得高分辨的子离子，方法特异性强，受干扰程度更小，可以有效提高基质样本分析中检测结果的准确性。
图5. 样品色谱图
总结
针对性的为NDSRI类新型亚硝胺杂质的检测分别开发出了高灵敏度和高专属性方案。利用三重四极杆仪器高灵敏度的优势，N-亚硝基依那普利最低定量限可达0.02ng/mL，相当于5 mg/mL原料药中的含量为4 μg/kg，完全满足该基因毒杂质的限度要求。
利用 QTRAP系统能同时定量和定性的优势，准确测定伏诺拉生制剂中痕量的NPV杂质并发现新的杂质。同时，利用X500R特有的MRMHR高分辨定量模式，开发出专属性更好的定量方案，为强基质干扰提供了更高效的定量方案。
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