分析仪/光化学衍生

【简单介绍】中药材中黄曲霉毒素的测定（完全执行2015 版ZG药典黄曲
霉毒素测定法）
1、适用范围
适合于陈皮、胖大海、僵蚕、酸枣仁、桃仁，柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、水蛭、全蝎等中药材品种。

【详细说明】

1、提取步骤
取供试品粉末约15.0 g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3.0 g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75.0 mL，高速搅拌2 分钟（搅拌速度大于11, 000 转/分），离心5 分钟(离心速度2500 转/分)，定性滤纸过滤、然后精密量取上清液15.0 mL，置50 ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，量取续滤液20.0 mL，待净化。

混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 标示浓度分别为1.0 μg/ml、0.3 μg/ml、1.0 μg/ml、0.3 μg/ml）0.5 ml，置10 ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。

2、免疫亲和SPE 柱净化步骤净化
SPE 柱：黄曲霉毒素免疫亲和柱（3 mL）
1）回温解冻：提前半个小时将黄曲霉毒素免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻；
2）上样：准确移取20mL提取好的样品溶液注入免疫亲和柱，使溶液以1滴/S的速度通过免疫亲和柱，直至2mL-3mL 空气通过柱体，弃去流出液；
3）淋洗：用20mL水淋洗免疫亲和柱，流速为1滴/s--2 滴/s，淋洗两次。直至空气进入免疫亲和柱，直至2mL-3mL空气通过柱体，弃去全部的流出液，抽干小柱；
4）洗脱：准确加入1.0 mL 甲醇洗脱，流速约为1滴/s，收集全部的洗脱液于干净的离心管中，用甲醇-乙腈-水(40: 18: 42)定容至2mL，供液相色谱测定。
注：1）进行加标回收率实验时，当样品用提取液提取完成，并用定量滤纸过滤之后即进行加标，然后进行免疫亲和柱净化等后续的处理。
2）黄曲霉毒素标准溶液的稀释，必须要用用流动相甲醇-乙腈-水(40: 18: 42)进行稀释，否则峰型极为不理想，这是本实验过程中的一个非常重要的小细节。
3）进行加标回收率实验时，取50μL 储备液，用流动相定容至2mL 即的。

3、色谱条件(光化学衍生方法)
色谱柱：C18,4.6×250mm, 5 μm，
流动相：甲醇-乙腈-水(40: 18: 42)
流速：0.8 mL/min
柱温：30 oC
进样量：20 μL
检测波长：Ex = 360 nm，Em = 450 nm

4.色谱图或者加标回收率结果

图1：陈皮项目四种黄曲霉毒素标准样品色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，浓度为0.75ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

图2：陈皮样品色谱图

图3：陈皮样品加标色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，加标浓度为0.75ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

图4：胖大海项目四种黄曲霉毒素标准样品色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，浓度为0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

图5：胖大海样品色谱图

图6：胖大海样品加标色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，加标浓度为0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

图7：僵蚕项目四种黄曲霉毒素标准样品色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，浓度为0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

图8：僵蚕样品色谱图

图9：僵蚕样品加标色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，加标浓度为0.75ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

图10：酸枣仁项目四种黄曲霉毒素标准样品色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，浓度为0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

图11：酸枣仁样品色谱图

图12：酸枣仁样品加标色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，加标浓度为0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

图13：桃仁项目四种黄曲霉毒素标准样品色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，浓度为0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

图14：桃仁样品色谱图

图15：桃仁样品加标色谱图（从左到右依次为G2，G1，B2，B1，加标浓度为0.75 ppb，2.5 ppb，0.75 ppb，2.5 ppb）

光化学衍生器
光化学柱后衍生反应器广泛应用于液相色谱检测分析，使用时置于色谱柱和检测器之间，进行柱后连续光化学衍生反应提高荧光、紫外、电化学检测和化学发光检测器的灵敏度和响应的选择性。
采取液相色谱-荧光法检测黄曲霉毒素时，使用光化学衍生器进行柱后衍生，不需要任何化学试剂，能
有效增强黄曲霉毒素B1 和G1 的荧光强度，黄曲霉毒素B1 和G1 灵敏度能够达到0.5ppb以下。光化学柱后衍生光化学反应装置除应用于黄曲霉毒素检测外, 还可以应用于大量的巴比妥酸盐、氨基酸、多肽、黄曲霉毒素、维生素及磺胺类药物等分析。

产品参数
货号：00782-0043；
运行环境温度5℃～40℃；
相对湿度≤85%；
适用电压220V(±10%)，50Hz(±2%)
最大流速1-2ml/min；
符合AOAC 2005.08, AOAC 2008.02, AOCS Aa 11-05，ZG台湾标准（食字0981800370 号公告）和欧盟药典2.8.18 标准分析方法，ZG药典（ZG药典增订光化学衍生法）。