用TL2020自动冷冻研磨仪进行玉米叶片液氮研磨的实验方法

目的：

批量研磨玉米叶片，为后续提取核酸，进行遗传或生理生化指标分析研究提供方便。为种子和农产品质量管理部门、种子公司等单位利用分子方法检测样品纯度、检测纯度真实性等实验所必需的样品前处理工作提供参考。

地点：某种业育种和栽培实验室

材料：新鲜玉米幼苗叶片

仪器：主机，TL2020自动冷冻研磨仪（又名TL2020高通量组织研磨仪）；配件：2ml研磨适配器,直径3或5mm研磨钢珠

图1：TL2020自动冷冻研磨仪

步骤：

1）取样：取新鲜玉米幼苗叶片，剪成直径6~8mm大小碎片；

2）将3-5片叶片碎片置于2ml离心管（EP管）中，同时加入1颗5mm和2颗3mm不锈钢研磨钢珠。

3）将加入叶片和研磨钢珠的EP管盖严密封，放入TL2020自动冷冻研磨仪的2ml研磨适配器中，然后和适配器一起整体浸入液氮中冷冻2-3分钟或至液氮不“沸腾”为止。

4）使用DHS特制的液氮研磨操作提篮迅速从液氮中取出适配器，并迅速将其固定在研磨仪的摇臂中；

5）设置TL2020的研磨时间为2分钟，研磨频率1500rpm（1500次/分钟）。

结果：

得到非常细碎的叶片粉末，后续提取核酸效果很好。

结论：

用TL2020自动冷冻研磨仪进行玉米叶片的液氮研磨，可以直接将研磨管和适配器浸泡在液氮里，只需一次性1-2分钟的液氮冷冻处理和一次约2分钟的研磨，就能批量粉碎多达56个2.0ml的样品（用96孔深孔板的话则是192个样品）。处理时间迅速，有效防止了温升，为后续有效提取核酸提供了保障。此外，还大大节省液氮，操作也更加安全。