用户论文｜国家富硒产品质量检验检测中心：全自动垂直振荡提取-超高效液相色谱-串联质谱法测定鱼肉中地西泮残留量
2024-09-0655全自动垂直振荡提取-超高效液相色谱-串联质谱法测定鱼肉中地西泮残留量
单长海 ,马作江 ,杨周 ,黄山 ,李翔 ,孙辉
（国家富硒产品质量检验检测中心，湖北恩施 445000）
DOI；10.3969/j.issn.1008-6145.2024.07.011
地西泮又名安定，属于苯二氮卓类镇静剂，具有镇静、抗惊厥等作用[1]。近年来，一些不法商贩在鱼类的捕捞和运输过程中非法使用地西泮，导致其在水产品中残留[2]。鱼肉是日常生活不可或缺的食物，人体长期摄入含有地西泮残留的鱼肉后，会产生一系列副作用，如易怒、嗜睡、幻听、头痛、乏力等，甚至可能导致药物依赖和耐药性，严重威胁人体健康[3-4]。许多国家已将地西泮列为动物养殖和运输过程中禁止使用的药物，GB 31650—2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》规定鱼肉中不得检出地西泮。目前，从鱼肉中地西泮的监管检验情况来看，检出率较高，是市场监管部门重点监管对象。
国家富硒产品质量检验检测中心发表的文章中，作者采用乙腈作为提取溶剂，V20垂直振荡器提取，MCX固相萃取小柱净化，并通过液相色谱-串联质谱法检测，方法提取效率高，净化效果好，降低了样品基质干扰，提高了方法准确性，可用于鱼肉中地西泮残留量的大批量检测。
2.1样品处理
称取鱼肉试样2 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈，在垂直振荡仪中以1 000 r/min振荡5 min。然后，以10000 r/min离心5 min，将上清液转入另一50 mL离心管中。对残渣再加入15 mL乙腈，重复提取并离心一次，合并两次上清液，并用氮气吹干。加入3 mL 5%(体积分数)乙酸水溶液，涡旋1 min。用3 mL甲醇和3 mL水依次活化MCX萃取柱，取备用液过柱，用5 mL 5%(体积分数，下同)乙酸水溶液洗涤，抽干，再用5 mL 10%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，并在40 ℃下用氮气吹干。用1.0 mL 20%乙腈水溶液溶解残渣，通过0.22 μm滤膜过滤，待上机测试。
2.2实验方法
以目标化合物质量浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。取经样品处理的待测溶液进行测定，将目标物色谱峰面积代入标准曲线方程中，得到样品提取液质量浓度，代入样品质量及提取液体积进行换算得到样品中目标物的质量浓度。
V20垂直振荡器，可以根据需要设置振荡频率，无需人工操作。比较提取5min振动频率分别为500、800、1000、1200、1500 次/min的提取效率，每个频率称取3个平行质控样，按照2.1样品处理的方法进行样品提取回收率试验。图1为不同振荡频率提取的鱼肉粉中地西泮残留量回收率，从图1中可以看出，当振动频率高于1000次/min时，提取效率无明显差别，因此提取频率采用1000次/min。
图1 不同振荡频率提取的鱼肉粉中地西泮残留量回收率
比较超声提取法、涡旋提取法和全自动垂直振荡仪提取法对质控样中地西泮提取的提取回收率，提取时间分别为5、10、15、20、30 min。按照2.1样品处理的方法进行样品提取回收率试验。图2为三种不同提取方式的鱼肉粉中地西泮回收率，从图2可以看出，超声法提取效率较低，可能是塑料离心管阻碍了超声波的传递，涡旋法提取效率次之，全自动垂直振荡提取法效率最高。综合以上，选择全自动垂直振荡提取法，以实现批量操作，省时省力，操作简单。
图2 三种不同提取方式的鱼肉粉中地西泮回收率
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