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Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸
摘要:
以石斑鱼为原料,使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17753.114mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的40.63%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.52%。
一、样品前处理
1、 所用试剂
1、1 浓盐酸,浓度≥36%,优级纯
1、2 6mol/L 盐酸:取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。
1、3 水:去离子水
1、4 苯酚:须重蒸
1、5 17种氨基酸标准品
行号 | 氨基酸 | 行号 | 氨基酸 | ||
1 | Asp | 天冬氨酸 | 2 | Thr | 苏氨酸 |
3 | Ser | 丝氨酸 | 4 | Glu | 谷氨酸 |
5 | Pro | 脯氨酸 | 6 | Gly | 甘氨酸 |
7 | Ala | 丙氨酸 | 8 | Cys | 胱氨酸 |
9 | Val | 缬氨酸 | 10 | Met | 蛋氨酸 |
11 | Ile | 异亮氨酸 | 12 | Leu | 亮氨酸 |
13 | Tyr | 酪氨酸 | 14 | Phe | 苯丙氨酸 |
15 | His | 组氨酸 | 16 | Lys | 赖氨酸 |
17 | Arg | 精氨酸 |
2、 前处理设备
1) 分析天平:感量分别为 0.0001g和0.00001g。
2) 水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL
3) 匀浆机。
4) 无油真空泵
5) 干浴水解浓缩仪
6) 移液管
7) 0.22um滤膜
3、 样品制备(参考国标GB 5009.124-2016)
原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏,采肉后清洗、沥干,在匀浆机中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷冻保存,分析时取出解冻后使用。
4、 试样水解
称取含蛋白7.5-25mg的试样,加入水解管中,加入15mL 6mol/L盐酸,继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中,110°C水解22-24h,冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取适量样液,在干浴水解浓缩仪中50°C吹干,必要时加入少许水,重复吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用。
二、分析方法描述(Biochrom 30+)
氨基酸分析仪分析方法参数:
1) 色谱柱:Biochrom Na型阳离子交换树脂柱,4.6´20cm
2) 分离程序:
NO. | Time | Temp | Buffer | Pump | Nin | Rec | Commands |
1 | 01:00 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | OFF | |
2 | 00:00 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | OFF | Reset |
3 | 01:00 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | OFF | Load |
4 | 06:40 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | ON | |
5 | 13:00 | 52 | 2 | 35.0ml/h | ON | ON | |
6 | 01:00 | 52 | 5 | 35.0ml/h | ON | ON | |
7 | 16:00 | 95 | 5 | 35.0ml/h | ON | ON | |
8 | 04:00 | 95 | 6 | 35.0ml/h | ON | ON | |
9 | 04:00 | 95 | 1 | 35.0ml/h | ON | ON | |
10 | 09:00 | 48 | 1 | 43.0ml/h | OFF | OFF | |
11 | 02:00 | 48 | 1 | 35.0ml/h | ON | OFF | |
End |
3) 运行时间:经分析时间+再生时间 57min
4) 反应单元温度:135°C。
5) 检测波长:570nm、440nm同时检测。
三、样品中氨基酸含量的计算
样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算:
ci = cs /As ×Ai ……………………(2)
式中:
ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;
As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;
cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。
试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:
Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)
式中:
Xi ———试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);
ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);
F ———稀释倍数;
V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);
M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);
m ———称样量,单位为克(g);
109 ———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;
100 ———换算系数。
附、石斑鱼分析图谱及做样结果
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