应用分享︱使用TSKgel G3000SWXL色谱柱测定双特异性抗体药物浓度

双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子（细胞）之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应，是基因工程抗体的一种，现已成为抗体工程领域的热点，在肿瘤的免疫治 疗中具有广阔的应用前景。

双特异性抗体药物具有浓度低及药效显著的特点，传统紫外-可见分光光度法只能准确检测A280nm，在0.3～0.7范围的蛋白浓度，无法准确测定低浓度蛋白样品。

本次分享的应用中，作者采用了TSKgel G3000SWXL凝胶色谱柱建立了测定低浓度双特异性抗体药物浓度方法[1]，该方法同时也适合于中、高浓度药物浓度检测。

分析条件  

色谱柱：TSKgel G3000SWXL (7.8 mmI.D.×30 cm, 5μm)

流动相：0.1 M磷酸氢二钠+0.1 M硫酸钠（磷酸调节pH到6.7）

流速：0.8 mL/min

进样体积：100 μL

柱温：25℃

检测器参数：UV@214 nm

分析结果  

图1  (A)流动相、(B)氯化钠注射液、(C)制剂缓冲液、(D)0.01 mg/mL对照品及(E)系统残留色谱图叠加

图2 峰面积与浓度线性关系图

结果与讨论 

采用TSKgel G3000SWXL建立的双特异性抗体浓度测定方法， 分离谱图见图1，在对照品出峰时间处无可见干扰峰，表明方法专属性良好。图2是线性考察结果，在浓度范围0.01～0.32 mg/mL范围内，峰面积与样品浓度，线性关系良好 (R2=1.00)，平均回收率在90.0%～110.0%之间，表明该方法准确度良好。

该方法使用的流动相无有机溶剂，属于非变性色谱流动相条件，可保证抗体药物分子不会发生变性，相对反相色谱方法更有优势。方法操作简单、快速，为抗体药物的有效性和安全性评价提供了可靠的浓度检测方法。

参考资料：

1. 廉开礼;崔岩;彭伟;曹宇;刘忠;张贵民,赵丽丽，分子体积排阻高效液相色谱法测定低浓度重组人源化抗BCMA/CD3双特异性抗体药物的浓度. 药物分析杂志. 2020,40(8): 1365-1370