应用分享︱FcR亲和色谱柱在抗体生产工艺条件优化中的应用
2024-06-07149抗体药物和抗体偶联药物的糖链结构不同，会对药效产生很大影响。东曹开发的以重组人源FcγⅢa受体（FcγRⅢa）为固定化配基的亲和色谱柱TSKgel FcR-ⅢA-NPR可对这些糖链进行分析。
图1中显示了该色谱柱可以应用于抗体生产中的各种工艺条件优化，例如筛选出ADCC活性高的细胞株、培养基的研究、培养细胞时的在线监控等。
图1 使用TSKgel FcR-IIIA-NPR分析抗体药物糖链的应用范围
除此以外，还可以应用于纯化抗体的生产批次的质量评价、原研抗体和抗体生物类似药的比较及评价、ADC药物纯化后的性能评价等方面。该分析柱的同类制备柱TSKgel FcR-ⅢA-5PW还可以进行实验室规模的抗体半制备层析。
本期推文我们将分享两篇关于培养基研究、抗体糖链结构/长度影响、ADC亲和色谱分析的最新研究文献。
文献一
Intracellular polyamine depletion induces N-linked galactosylation of the monoclonal antibody produced by CHO DP-12 cells
文献内容要点：
通过动物细胞培养获得的抗体药物，由于N-连接型糖链的不均一性会对药效产生影响，所以需要再生产工艺中进行有效控制。作为抗体药物生产细胞系之一的CHO细胞，在无血清培养基中不能生物合成粗细胞生长因子多胺。因此我们调查了在抗体生成中多胺对N-连接型糖链的影响。
其结果是，添加多胺生物合成抑制剂α-二氟甲基鸟氨酸（DFMO）可减弱细胞增殖，并使抗体产量减少30%。而另一方面，由于多胺缺失引起的内质网应激，会导致β-1, 4-葡萄糖醛酸转移酶1 (B4GAT1) 的mRNA量增加，使半乳糖基化的IgG量突增。另外，还从外部向细胞内多胺枯竭的细胞添加了多胺，其结果是抗体产生和半乳糖基化的恢复受到抑制。由此可以看出，添加多胺对抗体稳定生产有用，以及抗体质量控制的可能性。
在这篇论文中，作者使用TSKgel FcR-ⅢA-NPR亲和色谱柱分析了抗体的半乳糖基化程度。
文献链接：
https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2023.10.008
Chromatographic analysis of the N-glycan profile on therapeutic antibodies using FcgRIIIa affinity column chromatography
文献内容要点：
使用FcR-ⅢA-NPR亲和色谱柱研究了各种抗体药物、Fc、Fab和ADC的结合糖链结构（长度）对保留时间的影响。含有不均一糖链的抗体显示了多个分离峰。而含有均一糖链的抗体则显示了单个洗脱峰。另外，在Cys偶联ADC中，观察到于原抗体相同数量或更多的洗脱峰，但在Lys偶联ADC中欸有观察到明确的洗脱峰分离。
图2 使用FcγRIIIa亲和色谱柱的分析方法
使用该亲和色谱柱进行分析，反映出了ADCC活性，不仅可以应用于完整抗体，还可用来对较难进行细胞依赖性测定的Fc片段的评价。此外，还展示了控制抗体、ADC、Fc片段中的ADCC活性的聚糖重构策略。
研究人员在制备纯化用于分析的抗体量时，还使用了制备柱TSKgel FcR-ⅢA-5PW。
https://doi.org/10.1021/acsomega.3c02374
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