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应用分享︱FcR亲和色谱柱在抗体生产工艺条件优化中的应用

来源:东曹(上海)生物科技有限公司      分类:应用方案 2024-06-07 11:15:07 170阅读次数
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抗体药物和抗体偶联药物的糖链结构不同,会对药效产生很大影响。东曹开发的以重组人源FcγⅢa受体(FcγRⅢa)为固定化配基的亲和色谱柱TSKgel FcR-ⅢA-NPR可对这些糖链进行分析。

图1中显示了该色谱柱可以应用于抗体生产中的各种工艺条件优化,例如筛选出ADCC活性高的细胞株培养基的研究、培养细胞时的在线监控等。

图1  使用TSKgel FcR-IIIA-NPR分析抗体药物糖链的应用范围

除此以外,还可以应用于纯化抗体的生产批次的质量评价、原研抗体和抗体生物类似药的比较及评价ADC药物纯化后的性能评价等方面。该分析柱的同类制备柱TSKgel FcR-ⅢA-5PW还可以进行实验室规模的抗体半制备层析。

本期推文我们将分享两篇关于培养基研究、抗体糖链结构/长度影响、ADC亲和色谱分析的最新研究文献。


 文献一 


题目:

Intracellular polyamine depletion induces N-linked galactosylation of the monoclonal antibody produced by CHO DP-12 cells



文献内容要点:

通过动物细胞培养获得的抗体药物,由于N-连接型糖链的不均一性会对药效产生影响,所以需要再生产工艺中进行有效控制。作为抗体药物生产细胞系之一的CHO细胞,在无血清培养基中不能生物合成粗细胞生长因子多胺。因此我们调查了在抗体生成中多胺对N-连接型糖链的影响。

其结果是,添加多胺生物合成抑制剂α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)可减弱细胞增殖,并使抗体产量减少30%。而另一方面,由于多胺缺失引起的内质网应激,会导致β-1, 4-葡萄糖醛酸转移酶1 (B4GAT1) 的mRNA量增加,使半乳糖基化的IgG量突增。另外,还从外部向细胞内多胺枯竭的细胞添加了多胺,其结果是抗体产生和半乳糖基化的恢复受到抑制。由此可以看出,添加多胺对抗体稳定生产有用,以及抗体质量控制的可能性。

在这篇论文中,作者使用TSKgel FcR-ⅢA-NPR亲和色谱柱分析了抗体的半乳糖基化程度


文献链接:

https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2023.10.008


 文献二 

题目:

Chromatographic analysis of the N-glycan profile on therapeutic antibodies using FcgRIIIa affinity column chromatography



文献内容要点:

使用FcR-ⅢA-NPR亲和色谱柱研究了各种抗体药物、Fc、Fab和ADC的结合糖链结构(长度)对保留时间的影响。含有不均一糖链的抗体显示了多个分离峰。而含有均一糖链的抗体则显示了单个洗脱峰。另外,在Cys偶联ADC中,观察到于原抗体相同数量或更多的洗脱峰,但在Lys偶联ADC中欸有观察到明确的洗脱峰分离。

图2  使用FcγRIIIa亲和色谱柱的分析方法

使用该亲和色谱柱进行分析,反映出了ADCC活性,不仅可以应用于完整抗体,还可用来对较难进行细胞依赖性测定的Fc片段的评价此外,还展示了控制抗体、ADC、Fc片段中的ADCC活性的聚糖重构策略。

研究人员在制备纯化用于分析的抗体量时,还使用了制备柱TSKgel FcR-ⅢA-5PW。


文献链接:

https://doi.org/10.1021/acsomega.3c02374




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最近更新:2025-04-02 13:53:57
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