应用分享︱FcR亲和色谱柱在抗体生产工艺条件优化中的应用
抗体药物和抗体偶联药物的糖链结构不同,会对药效产生很大影响。东曹开发的以重组人源FcγⅢa受体(FcγRⅢa)为固定化配基的亲和色谱柱TSKgel FcR-ⅢA-NPR可对这些糖链进行分析。
图1中显示了该色谱柱可以应用于抗体生产中的各种工艺条件优化,例如筛选出ADCC活性高的细胞株、培养基的研究、培养细胞时的在线监控等。
图1 使用TSKgel FcR-IIIA-NPR分析抗体药物糖链的应用范围
除此以外,还可以应用于纯化抗体的生产批次的质量评价、原研抗体和抗体生物类似药的比较及评价、ADC药物纯化后的性能评价等方面。该分析柱的同类制备柱TSKgel FcR-ⅢA-5PW还可以进行实验室规模的抗体半制备层析。
本期推文我们将分享两篇关于培养基研究、抗体糖链结构/长度影响、ADC亲和色谱分析的最新研究文献。
文献一
Intracellular polyamine depletion induces N-linked galactosylation of the monoclonal antibody produced by CHO DP-12 cells
文献内容要点:
通过动物细胞培养获得的抗体药物,由于N-连接型糖链的不均一性会对药效产生影响,所以需要再生产工艺中进行有效控制。作为抗体药物生产细胞系之一的CHO细胞,在无血清培养基中不能生物合成粗细胞生长因子多胺。因此我们调查了在抗体生成中多胺对N-连接型糖链的影响。
其结果是,添加多胺生物合成抑制剂α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)可减弱细胞增殖,并使抗体产量减少30%。而另一方面,由于多胺缺失引起的内质网应激,会导致β-1, 4-葡萄糖醛酸转移酶1 (B4GAT1) 的mRNA量增加,使半乳糖基化的IgG量突增。另外,还从外部向细胞内多胺枯竭的细胞添加了多胺,其结果是抗体产生和半乳糖基化的恢复受到抑制。由此可以看出,添加多胺对抗体稳定生产有用,以及抗体质量控制的可能性。
在这篇论文中,作者使用TSKgel FcR-ⅢA-NPR亲和色谱柱分析了抗体的半乳糖基化程度。
文献链接:
https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2023.10.008
Chromatographic analysis of the N-glycan profile on therapeutic antibodies using FcgRIIIa affinity column chromatography
文献内容要点:
使用FcR-ⅢA-NPR亲和色谱柱研究了各种抗体药物、Fc、Fab和ADC的结合糖链结构(长度)对保留时间的影响。含有不均一糖链的抗体显示了多个分离峰。而含有均一糖链的抗体则显示了单个洗脱峰。另外,在Cys偶联ADC中,观察到于原抗体相同数量或更多的洗脱峰,但在Lys偶联ADC中欸有观察到明确的洗脱峰分离。
图2 使用FcγRIIIa亲和色谱柱的分析方法
使用该亲和色谱柱进行分析,反映出了ADCC活性,不仅可以应用于完整抗体,还可用来对较难进行细胞依赖性测定的Fc片段的评价。此外,还展示了控制抗体、ADC、Fc片段中的ADCC活性的聚糖重构策略。
研究人员在制备纯化用于分析的抗体量时,还使用了制备柱TSKgel FcR-ⅢA-5PW。
https://doi.org/10.1021/acsomega.3c02374
加速提升填料产能,东曹积极应对生物制药行业旺盛需求
使用高效凝胶色谱柱分析头孢卡品酯中有关物质Ⅱ
TOYOPEARL填料在双特异性抗体纯化工艺中的应用
参考QB/T 5715-2022测定发酵液中衣康酸的含量
阴离子交换色谱法分离完整AAV衣壳和空AAV衣壳
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- 应用分享︱FcR亲和色谱柱在抗体生产工艺条件优化中的应用
- 抗体药物和抗体偶联药物的糖链结构不同,会对药效产生很大影响。东曹开发的以重组人源FcγⅢa受体(FcγRⅢa
-
- 多特异性亲和-Heparin亲和填料应用案例分享
- 肝素与多种生物分子都具有亲和作用,基于这一特性,博格隆将其共价偶联到高交联度琼脂糖上,制成一种族特异性亲和层析介质——Heparin Bestarose FF。
-
- 应用分享|采用TSKgel G3000SWXL色谱柱分析PD-1/CTLA-4双特异性抗体
- 双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体,能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁,激发具有导向性
-
- 优化噬菌体纳米抗体展示库电转化条件
- 噬菌体纳米抗体展示库电转化效率提升难题。通过系统调控电转化关键参数,如电压、电容、脉冲时长及感受态细胞状态等,经多轮对比实验,成功优化条件,显著提高转化效率,为高质量纳米抗体库构建及筛选奠定坚实基础,
-
- 一次性超滤系统在抗体ADC中的应用优势
- 欢迎文末扫码下载《从超滤系统和超滤膜的角度看工艺开发中超滤步骤考量点》
-
- 应用分享 | 532nm拉曼光谱仪在煤燃烧中的应用
- 如海Portman拉曼光谱仪,可用于分析煤炭燃烧过程,对环境保护措施的优化有深远影响。
-
- 应用分享 | TOF-SIMS在有机材料研究中的应用
- 飞行时间质量分析器具备全质量范围扫描的特点,在一次采集过程中能够收集到较大质量范围内的所有分子离子碎片。当使用TOF-SIMS对有机材料进行分析时,我们通过谱图解析可以识别出这些分子离子对应的有机分子
-
- 应用探析| PIV系统在水处理技术优化中的应用
- 青海大学与清华大学联合研究团队,开展了一项基于粒子图像测速系统(PIV系统)的实验研究,揭示了电絮凝过程中气泡动力学行为与流场演化的耦合规律。
-
- 精氨酸在抗体纯化中的应用案例分享
- 欢迎文末扫码下载相关资料
-
- 构建噬菌体展示抗体库过程中电穿孔法的条件优化
- 在构建噬菌体展示抗体库的过程中,电穿孔法的关键作用及条件优化策略。通过对电穿孔技术原理的剖析,结合一系列实验研究,旨在为生命科学领域的研究者提供更高效、可靠的方法来优化电穿孔条件。
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
参与评论
登录后参与评论