参照USP<129>修订案建立单克隆抗体的SEC-UHPLC分析方法
2024-03-2257继USP<621>修订版生效之后，美国药典又于2023年5月在PF49 (3) 中提议对通则<129>治疗性重组单克隆抗体药物的分析方法 (Analytical Procedures for Recombinant Therapeutic Monoclonal Antibodies1) ) 进行修订：针对用于蛋白质SEC分析的L59型色谱柱，增加超高速、高性能的UHPLC色谱柱，即补充了单克隆抗体的SEC-UHPLC分析方法。
经过开放评议后，本次修订案作为USP-NF2024, Issue 3, 于2023年12月1日正式公布。如表1所示，对原有的L59型色谱柱尺寸 (30 cm) 增加了UHPLC专用的30 cm色谱柱。
表1. L59型色谱柱同时收录了TSKgel G3000SWXL和TSKgel UP-SW3000
USP<129>中规定了使用L59型色谱柱分析抗体的多聚体、单体和片段。其中，比较有代表性的是将TSKgel G3000SWXL (5μm, HPLC) 转换为TSKgel UP-SW3000-LS (2μm, UHPLC) 。
除此以外，还可以将用于分离抗体片段的TSKgel G2000SWXL转换为TSKgel UP-SW2000。将用于分离多聚体的TSKgel G4000SWXL (8μm) 转换为TSKgel UP-SW Aggregate (3μm)，分析条件的变更请参照表2。
表2. 从HPLC色谱柱转换为UHPLC色谱柱时分离条件的变更
图1是在分析单克隆抗体时，从30 cm的G3000SWXL色谱柱转换为15 cm的UP-SW3000-LS色谱柱，在保持同等分离度的前提下，分析时间缩短约50%，流动相减少约80%。
图1. SEC-HPLC (30 cm色谱柱) 转换为SEC-UHPLC (15 cm色谱柱) 的分离例
有时为了提高分离度会串联2支30 cm的SEC-HPLC色谱柱进行分析，这种情况下，可转换为使用30 cm的SEC-UHPLC色谱柱进行分析，也能期待同样的缩减效果（图2）。
图2. SEC-HPLC (30 cm色谱柱×2支) 转换为SEC-UHPLC (30 cm色谱柱) 的分离例
参考文献
1. USP<129>, https://www.usp.org/sites/default/files/usp/document/our-work/biologics/guide-proc-for-recombinant-therapeutic.pdf
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