全球第一台可以实时定量蛋白-细胞相互作用的系统
全球第一台可以计算细胞表面受体数量的系统
源于乌普萨拉大学生物医学放射学实验室的先进技术
研发团队
LigandTracer系列仪器的研发团队来自于Ridgeview Instruments AB,起源于素有瑞典的剑桥大学、美苏核竞争见证人之称的瑞典乌普萨拉大学,瑞典乌普萨拉Ridgeview Instruments AB团队研发出全球第一台SPR技术(现为美国GE公司Biacore产品),开创了蛋白相互作用的新领域。但经典的SPR技术主要用于大分子相互作用实时分析,而无法满足蛋白和细胞,蛋白和组织相互作用的实时分析。随着蛋白研究的深入,研究的目标已经开始由大分子之间的相互作用,发展到蛋白跟细胞,甚至组织的相互作用研究。该团队目前又开发出第一款可以实时定量蛋白-蛋白,蛋白-细胞,蛋白-组织相互作用的LigandTracer,其中LIGANDTRACER Green 荧光标记检测系统借助专业的荧光检测器,可以在长达几分钟至几小时的时间内,对FITC或其它类似荧光标记配体与细胞表面受体相互作用进行实时观察及动力学和亲和力分析研究。相关文献发表于Nature以及核医学的ding级杂志。LigandTracer也成为目前**专业的蛋白-细胞相互作用实时分析系统。
工作原理
实验室常用的细胞培养皿放在一个倾斜的、缓慢旋转的支架上,培养皿上方安装着探测器。含有标记蛋白的溶液加在培养皿底部,通过旋转,细胞会接触带标记的溶液,随着标记蛋白结合到细胞上,就会有清楚地波峰出现在实时监测的图像上。每次监测得到的波峰高度可以单独提出来分析,进行持续观察、分析。,通过比较含有不同浓度的标记蛋白的峰的高度可以计算和推导细胞和蛋白相互作用的亲和力大小。
LIGANDTRACER Green 荧光标记检测系统
这款仪器真正实现了在任何一个实验室都可以实时分析蛋白-细胞相互作用。借助专业的荧光检测器,可以在长达几分钟至几小时的时间内,对荧光标记配体与细胞表面受体相互作用进行实时观察及动力学和亲和力分析研究。
LED荧光激发检测器:
蓝色(488nm)-绿色(535nm)FITC检测和其它类似的荧光基团
黄色(590nm)-红(632nm)罗丹明红和类似的荧光基团
红色(632nm)-近红外(670nm)Alexa Fluor和类似的荧光探针
特点
实时监测孵育期和漂洗后的蛋白-细胞相互作用
可进行几分钟甚至几天的长时间连续观察
可精确观察和记录极易解离的蛋白互作
操作简单,样品用量少,无需清洗培养皿
应用范围:
主要用于基于配基-受体的相互作用、抗原-抗体相互作用的免疫学领域以及医学诊断、药物筛选、肿瘤细胞的增殖与凋亡、细胞信号转导等方面的研究。
动力学研究,如检测抗体特异性、蛋白与细胞的结合速率、蛋白与细胞的亲和-解离速率、亲和力(KD常数)
靶向药物研发、EC50
疾病ZL,癌分子靶向ZL药物LX监测,药物分子与细胞的相互作用等等
LigandTracer优点解析:
1.本仪器应用定位在蛋白、细胞、组织水平上
所有的实验结果只有到细胞、组织甚至个体水平上才能真正有说服力!
蛋白之间相互作用分析检测方法有很多,比如SPR、QCM、RIA、IF、Microarray、ELISA、Y2H、FRET等等,但大多都是基于终点饱和法,并多次重复,无法掌握过程变化,目前能应用于细胞与蛋白互作的,。而LigandTracer可以测定蛋白与细胞上、组织切片上蛋白之间的相互作用,且能满足在相对低价位、实时监测。
2.实时监测:
实时检测对于研究具有不同动力学的蛋白相互作用具有很强的指导意义,实时数据提供了可靠的孵育时间和洗脱时间,大大降低了实验的盲目性和不确定性,甚至避免了错误的实验结果;同时在医药研发、药物筛选中也起到很好的比对结果,大大缩短了药物筛选的时间。
3.不仅能测亲和力,还能够实时反映动力学过程,无需反应达到平衡:
目前传统的测定Affinity主要是靠达到动态平衡后加入的浓度推断,即终点法测定。然而,不同类型的结合方式或动力学不同(如fast on- fast off和slow on- slow off)可能会导致差异很大的结果,孵育时间、冲洗时间均是很大的影响因素。对于fast on- fast off类型的蛋白互作来说,它可能在短时间内即达到平衡后不久开始解离,但若孵育时间长可能会在洗脱过程之前就开始解离、当洗脱后可能全部已解离完毕,采用终点法测定会误以为根本没有结合而得出错误的结论;而对slow on- slow off类型来说,为达到动态平衡往往需要数小时甚至数天,但因曲线趋势变化很微弱,往往会被实验者误以为已经达到平衡;如果单独靠进一步延长孵育时间,又存在抗体蛋白被细胞代谢掉的危险,从而结果也不准确。
LigandTracer,摒弃传统终点法测定,结合实时图像分析即可得到准确数据,无需反应达到平衡,节约时间和配体用量,同时也大大节省了人力、物力!这一点在新药筛选方面会更加有用,如要求效果快速的安眠药和要求药效时间长的止痛YF面应用的就不应该是同样的动力学过程,如果有实时数据的帮助,药物筛选效率会大大提高。
4.能够根据实时数据推断细胞表面受体数量,无需用饱和法测定,既节省了试剂同时结果足够准确。
5.多种型号满足不同实验室需求:
除了Green型仪器外,还有另外三种放射性标记检测的仪器Yellow/Grey/White,让实验人员有更多种选择。
6.功能强大:
(1)SJ应用于实时监测和反映蛋白与细胞结合速率和结合保留时间
(2)使用非常方便,同时有先进的软件可以长至几天的监测和进行数据分析处理
(3)KD常数的准确测定,无需计数细胞、根据曲线变化即可反映结合效率等常数
(4)动力学研究
(5)可以定量测定每个细胞受体数量
(6)使用范围广泛:一切基于抗原-抗体相互作用,配基-受体相互作用原理的实验都可以应用此仪器。所以在免疫学领域,蛋白质组学领域,医学诊断、药物筛选等核医学领域,以及肿瘤细胞增殖与凋亡、细胞信号转导等基础生命科学研究领域都可以得到广泛应用。