PCR新手指南：各种热启动酶存在的意义

各种热启动酶存在的意义


市场上热启动的酶种类很多，但新手并不完全了解热启动酶存在的意义。
非热启动的Taq酶在较低温度时也有活性：我有一本1992年出版的《PCR基因扩增实验操作手册》中提到，酶在70度时的合成速度为60核苷/秒/酶分子，55度时为22，37度时为1.5，22度时为0.25。也就是说此时引物还没有正常配对（其可能错误配对），而酶已经开始合成了，其合成的产物就会成为以后扩增中的非特异模板。

则热启动酶只有在95度高温一段时间后，其酶活动才启动起来，故名：热启动酶。


这也是为什么进行PCR反应加样时，各种试剂要在低温下加样。但是不是在进行PCR反应加样时维持低温就不需要热启动酶了呢？答案是也不尽然。


一般PCR仪在运行开始后热盖加热过程中，模板温度是不控制的。由于热盖的加热需要1.5分钟以上，且热盖温度一般设在105度，必然会引起模块温度的上升，一般会到30-35度，环境温度高时更甚。也就是说设计不完备的仪器也会提高非特异性反应。

有些仪器的热盖在开机时就启动，这样做有可以广场烫手且用户开机后立即启动PCR程序也会造成非特异性反应。东胜龙811PCR仪的解决办法是在运行开始后热盖加热过程中迅速将模块降温到10度左右。热盖温度到达后启动程序运行。