顺磁小课堂52期 | 对于具有顺磁性中心的蛋白质或进行了自旋标记的蛋白质,可否用顺磁共振技术进行测试?
2024-05-31253顺磁小课堂(第52期)
作为波谱学的重要分支,电子自旋的直接表征工具,电子顺磁共振波谱学具有不可替代的重要作用。部分初学者常面临基本原理不清、谱图解析困难、仪器操作不熟练等问题。
为帮助大家更好地运用电子顺磁共振波谱技术,国仪量子携手清华大学磁共振实验室推出“顺磁小课堂”栏目,一一解答大家在学习、实验中遇到的问题。
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01
判断题:核磁共振是测试蛋白质结构的主要手段之一,对于具有顺磁性中心的蛋白质,或者进行了自旋标记的蛋白质,可否用顺磁共振技术进行测试。
A. 是
B. 否
答:A
EPR技术的检测对象是至少含有一个未成对电子的物质,因此EPR技术可以检测含有顺磁性金属离子的金属蛋白,或用自旋探针标记过的蛋白质,而不能直接检测所有蛋白质的结构。
02
多选题:影响EPR测试定量准确性的因素有哪些?
A. 实验参数的设置
B. 样品的材料(介电常数)
C. 样品的尺寸和形状
D. 样品的放置位置和方向
E. 数据处理(基线选取、基线拟合等操作)
答:ABCDE
影响EPR测试定量准确性的误差来源见下图。
03
判断题:捕获剂BMPO与羟基自由基的结合能力强于DMPO与羟基自由基的结合能力。是否在用EPR技术检测羟基自由基时,应优先选择BMPO作为捕获剂?
A. 是
B. 否
答:B
在水体系中,BMPO可以同时检测羟基自由基和超氧阴离子,二者信号无法区分。因此在用EPR技术检测羟基自由基时,应具体情况具体分析,并非BMPO是最佳的捕获剂选择。
04
判断题:在进行自旋捕获时,捕获剂应该在反应开始之前加入。
A. 是
B. 否
C. 具体情况具体分析
答:C
通常情况下,在捕获短寿命自由基时,由于捕获剂寿命过短,捕获剂应在光照之前、反应之前加入。但有些捕获剂(如DMPO)也是自由基诱导剂,具有诱导产生自由基的作用。所以建议在正式测试之前,先进行空白对照实验,确定捕获剂对体系产生自由基的影响,因此需要具体问题具体分析。
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供稿:
清华大学 杨海军 李勇 李文郁
国仪量子 石致富 陈阳 范莹莹
审核:杨海军
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