褐藻胶寡糖中的甘露糖醛酸单糖和古罗糖醛酸单糖含量的测定

褐藻胶寡糖具有多种生物学功能，有整肠、降血糖血脂、抗凝血、抗炎、免疫调节等作用。

在医药、食品领域，褐藻胶寡糖可作为糖尿病、肥胖症、直肠结肠癌、习惯性便秘患者的疗效食品；在饲料领域，褐藻寡糖克服了以往所有抗生素、益生素、酶制剂等的不足，用量少、天然、无残留且稳定性强，并能提高动物机体的抗病能力，促进动物生长，增加动物营养，是优良的饲料添加剂。

褐藻胶是由1，4-甘露糖醛酸 (M)和1，4-古罗糖醛酸(G)不规则链接起来的线性长链分子，采用不同的降解方法（酸降解法，酶降解法，氧化降解法）降解褐藻胶，可以得到聚合度20以下的系列褐藻胶寡糖，由β-D-聚甘露糖醛酸(M)和α-L-聚古罗糖醛酸(G)组成的线型低聚合物，有聚甘露糖醛酸（PM）、聚古罗糖醛酸（PG）和杂合褐藻寡糖（PMG）三种类型产品。

褐藻胶寡糖是一种淡黄褐色粉末，能溶于水，稳定性强。本实验中使用具有脉冲安培检测器的高效阴离子交换色谱对褐藻胶寡糖中的甘露糖醛酸单糖和古罗糖醛酸单糖进行检测。详情如下：

壹

仪器和设备

表1 实验过程中所使用的仪器设备

贰

试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为优级纯。

水：超纯水（18.2MΩ•cm）；

50%氢氧化钠：色谱纯；

无水乙酸钠：优级纯；

古罗糖醛酸单糖（客户提供）：2mmol/L；

甘露糖醛酸单糖（客户提供）：2mmol/L。

叁

样品的制备

精密称取褐藻胶G段寡糖0.1088g，用超纯水溶解稀释定容到100mL，经0.22 μm滤膜过滤，直接进样分析。

精密称取褐藻胶寡糖0.1049g，用超纯水溶解稀释定容到100mL，经0.22 μm滤膜过滤，直接进样分析。

将古罗糖醛酸单糖标准品（客户提供）稀释20倍，直接进样分析。

将甘露糖醛酸单糖标准品（客户提供）稀释20倍，直接进样分析。

肆

分析步骤

色谱条件

流动相：

溶剂A：超纯水；

溶剂B：250mM氢氧化钠；

溶剂C：250mM氢氧化钠+500mM乙酸钠水溶液。

表2 淋洗液梯度变化表

流  速：0.5mL/min；

柱  温：30℃；

进样量：25μL；

色谱柱：Dionex CarboPac PA20 Analytical色谱柱，150 mm×3mm，配Dionex CarboPac PA20 Guard保护柱30 mm×3 mm。

电化学检测器参数

模式：脉冲安培；检测频率：2Hz；反应时长Ts=200ms；Flexcell金电极。

表3 检测器波形设置

衰减200μA；滤波器0.050Hz

标准溶液色谱图

0.1mmol/L古罗糖醛酸单糖标准品色谱图

0.1mmol/L甘露糖醛酸单糖标准品色谱图

空白色谱图

空白试样的色谱图

样品测定

褐藻胶G段寡糖色谱图

褐藻胶寡糖色谱图

伍

结果与计算

表4  检测结果（含量%）

备注：①ND表明未检出或低于检出限；②测定值已扣除空白值；③不同方法、不同实验室间检测结果会存在差异。