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如何判断细胞被污染？

第一步——用肉眼观察培养基状态

先看培养细胞的器皿有没有裂缝，如果有则污染几率非常大。

再看培养基颜色，正常情况下，培养基颜色是红色或者粉色，如果是橙色或黄色，则可能是污染或者细胞过密。

最后，观察培养基是否澄清，如果有少许漂浮物，则可能是污染或者有细胞凋亡，如果培养基很浑浊，甚至出现絮状物，则污染几率非常大。

图：肉眼可见浑浊有絮状物的培养基，细胞已被污染

第二步——静置细胞 1～2 h，使用显微镜观察

菌类污染通常分为细菌、真菌霉菌和支原体，形态特征如下：

五种可能会出现污染的场景及解决方案

▲ 细胞实验过程中所涉及的试剂及耗材没有消毒完全

首先对所有可清洗的设备和容器进行清洁，以清除任何污垢或碎屑，接着使用高压灭菌器或化学消毒剂进行正确灭菌及消毒操作，玻璃器皿应倒置存放，塑料制品应存放在干净、干燥的地方。

▲ 超净台脏乱，操作空间里还有废物

在超净台内摆放过多的器材容易阻挡气道，还会阻碍紫外线对操作空间的灭菌。所以，超净台只摆放当次操作需要的用具，其余物品在操作结束后应及时取出。操作台面的物品应按照 “新月形” 布局进行调整（如下图）。

图：合理布置的超净台

▲ 细胞处理方式不当，产生气泡引入微生物

细胞培养瓶中的气泡可能导致培养基污染、细胞生长抑制、氧气供应不足、二氧化碳积累和细胞贴壁困难。进行细胞培养时，应定期检查培养瓶以监测气泡情况，并轻轻旋转或使用过滤器来减少气泡。

▲ 培养箱中补充蒸馏水时容易导致污染

如果不取出承液盘而直接倒入蒸馏水，污染物依旧会残留。应该定期（每周 1-2 次）将承液盘整体移出并清空，然后用 70% 的酒精或异丙醇溶液擦拭消毒，待干燥后添加无菌蒸馏水，再放回培养箱内。

图：正确更换蒸馏水

▲ 培养箱长时间不清理造成污染

由于培养箱中高温高湿的环境非常适于微生物繁殖，且生长速度较快，长时间不进行箱体内部的清洁消毒会容易造成污染和交叉感染。因此，要对培养箱的内部腔体进行定期清洗、消毒操作。