应用EZsepMAX固相萃取柱建立动物性食品中碘醚柳胺残留量的检测方法

碘醚柳胺是卤化水杨酰苯胺类杀吸虫药，可以抑制虫体线粒体的磷酸化过程，从而阻止虫体内三磷酸腺甙Chemicalbook（ATP）的合成，导致虫体能量代谢的活力迅速减弱而死亡。它与血液蛋白有很强的亲和力，所以药效在血液中有较长的持续时间，造成药物在动物体内富集，而人类食用这些肉类会使兽药残留进入人体，从而影响身体健康。

本文参照《动物性食品中碘醚柳胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法（征求意见稿）》，利用EZsep?MAX固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12802）进行净化，再用高效液相色谱串联质谱仪进行检测，建立了一种对动物性食品中碘醚柳胺残留量的分析方法。

关键词：

动物性食品，碘醚柳胺，固相萃取

1.1 仪器与试剂

MPREP-SPE08手动固相萃取装置，货号：PZ0008，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

E.T.氮吹浓缩仪，货号：C020017，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

4500质谱系统，SCIEX公司；

EZsep?MAX固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12802），北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

冷冻离心机，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科学仪器厂；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙腈（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

甲酸，氨水，三乙胺等化学品均为分析纯或以上，购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 工作液配制

碘醚柳胺标准物质：100mg/瓶，购自坛墨质检标准物质中心。

碘醚柳胺标准储备液：取碘醚柳胺标准品适量(相当于有效成分约10mg)，精密称定，用乙腈稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度为1000μg/mL的碘醚柳胺标准储备液。

碘醚柳胺标准中间液：移取碘醚柳胺标准储备液0.1mL，用乙腈稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度为10μg/mL的碘醚柳胺标准中间液。

碘醚柳胺标准使用液：碘醚柳胺标准中间液0.1mL，用乙腈稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度为0.1μg/mL的碘醚柳胺标准使用液。

移取0.1μg/mL的碘醚柳胺标准使用液0.02、0.1、0.5、2.0、5.0mL分别置于10mL容量瓶中用甲醇定容至刻度，标准浓度为0.2μg/L、1μg/L、5μg/L、20μg/L、50μg/L。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

取羊腰试样2g，置于50mL聚丙烯离心管中，加10.0mL1%三乙胺乙腈溶液均质5min,超声提取10min，8000r/min离心5min，收集上清液至另一50mL离心管中残渣中加10.0mL1%三乙胺乙腈溶液，重复提取一次，合并两次上清液，混匀，取提取液5.0mL备用待净化。

1.3.2 固相萃取净化 

EZsep?X固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12802）用5mL乙腈进行活化，取1.3.1待净化液上样，上样结束后用5mL乙腈淋洗萃取柱，再用5mL5%甲酸乙腈洗脱萃取柱，收集洗脱液，以E.T.氮吹浓缩仪，45℃氮气浓缩至近干，加2.0mL甲醇，涡旋混匀过微孔滤膜后供LC-MS/MS测定。

1.3.3 LC-MS/MS仪器条件

色谱柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

检测方式：多反应监测（MRM）；

流动相：A：0.1%氨水水溶液 B：甲醇；

流速：0.3mL/min；

进样量：5μL。

表1 流动相梯度洗脱表

表2 加标回收率结果

图1 标液色谱图

图2 碘醚柳胺标准曲线图

本次实验展示了使用EZsep?MAX固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12802）对动物性食品中碘醚柳胺残留量进行净化，通过高效液相色谱串联质谱进行测定，其加标回收率在85.0%~93.3%之间，RSD在3.6%，能够满足标准要求。说明EZsep?MAX固相萃取柱（60mg/3mL，货号：PZ12802）能很好地完成方法中的净化工作，并且结果稳定、可靠。

1. 《动物性食品中碘醚柳胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法（征求意见稿）》