血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-超高效方案
2024-07-19152简介
本方法使用创新型超高效分体式HMR净化管/96孔板结合96孔正压固相萃取装置一步式净化血清样品,再通过LC-MS/MS进行检测,回收率达90%左右。样品处理过程简单,结果准确。
方法优势
蛋白沉淀和磷脂去除一步完成,可有效去除血清中蛋白、磷脂类化合物对实验结果的影响
通过式净化,极大简化前处理步骤,约1h即可完成前处理操作
上样量仅需50μL,大大节省了宝贵的样品
试剂耗材使用量更少,更加环保节约
柱效远超直通式SPE,回收率稳定,可达90%左右
配套设备及耗材
样品前处理
仪器条件
1)色谱条件
色谱柱:Leosil C18/PFP核壳柱 (2.7μm, 100* 2.1mm)
流动相:5mmol/L乙酸铵甲醇(A),5mmol/L乙酸铵水溶液(B)
流速:0.4mL/min
柱温:50℃
进样量:2μL
流动相梯度表
2)质谱条件
AB 6500+质谱检测器采用多反应检测模式(Multiple Reaction Monitoring,MRM), ESI负离子模式。
离子源:电喷雾离子源;
扫描方式:负离子扫描;
检测方式:多反应离子监测(MRM);
电喷雾电压:-4500V;
离子源温度:400℃;
辅助气1:60psi;
辅助气2:60psi;
气帘气:30psi;
碰撞气体:Medium
目标PFASs的离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下表
方法定量限
在以下两种方法中取最大值作为本项目的方法定量限(Limit of quantification,LOQ):(1)在实际血清基质中满足信噪比大于10的最低浓度,信噪比采用RMS(Root Mean Square,RMS)方法;(2)标准曲线工作范围内满足实测浓度在理论值偏差±20%之内的最低浓度。由于本研究中样品未经浓缩和稀释,无稀释倍数,因此方法定量限即为LOQ,如下表。
16种PFASs的定量限
回收率和精密度
血清中16种全氟化合物不同水平加标回收率和精密度(n=6)
实验注意事项
1、内标体积太小(50、20微升),稍微有损失,就会影响定量,所以建议先加样品、再加内标,最后加乙腈;
2、加液体过程中,一定注意尽量让移液枪的枪头接近净化管中最上层筛板加液。需要正确使用移液枪,特别是小体积加样时;
3、建议分两次加入乙腈。如果只加一次乙腈,可能洗脱不完全,净化管里有残留。压完一次,加入乙腈,再正压;
4、乙腈:血清的比例从3:1开始优化;
5、其他项目根据化合物的性质选择甲醇或乙腈作为提取溶剂。