应用丨使用离心分配色谱法(CPC)从连翘中纯化连翘脂苷A
概论
目的
连翘Forsythia suspensa (Thumb.) Vahl.,是一种在中国、韩国和日本被广泛用于治疗淋病、丹毒、炎症、发热、溃疡和其他疾病的传统药物。1 连翘脂苷A是一种苯乙醇糖苷,是从连翘风干果实中提取的主要活性成分之一(图 2)。据报道,其具有广泛的药理作用,包括消炎和抗氧化活性。2
连翘苷A的相关研究需要大量的标准品。科学家们一直在寻找一种简单有效的方法来分离这种有效化合物。在过去,常使用开口(低压)柱色谱法,但这导致了很高的时间和溶剂成本。现在,使用离心分配色谱(CPC)技术可以Z大限度地降低这些成本。
CPC是一种无需基质的全液分配色谱,无不可逆吸附,样品回收率高,样品载量高,可直接从实验室规模放大到工业规模。3 本文介绍了使用CPC 对连翘脂苷A进行分离纯化的方法。
图1
连翘脂苷A的结构
图2
连翘的果实
材料和方法
仪器
Gilson VERITY? 实验级离心分配色谱系统, 由
CPC 250 离心分配色谱和PLC 2050 纯化色谱系统组成。PLC 2050 纯化色谱系统包括一个50 mL/min 的四元梯度泵,UV/VIS检测器,馏分收集器以及Gilson Glider 控制软件(图 3)。
图3
CPC 250 离心分配色谱与PLC2050纯化色谱系统
粗提物的制备
将连翘果实经 100%甲醇处理的提取物悬浮于水中。水溶液在二氯甲烷、乙酸乙酯(EtOAc)和水饱和正丁醇(n-BuOH)之间进行分配。将正丁醇馏分冷冻干燥后用于CPC纯化。
离心分配色谱(CPC)的分离步骤
本应用选择使用Yang M. et. 1 发表的溶剂体系进行实验级测试。将乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水 (4:0.5:0.5:5,v/v)的混合物在分液斗中摇晃,并在室温下分离。上层相作为固定相,下层相作为流动相。连翘果实的正丁醇馏分分次(第1次1 g,第2次3 g;第3次2.85 g)溶解于4 mL溶剂混合物(溶剂体系为上相2 mL,下相2 mL)中,并用PTFE滤器(疏水膜;直径:13mm,孔径:0.45 μm)进行过滤。
以30 mL/min的流速将固定相充满250 mLCPC 系统,转速保持在500 rpm。然后将下相以8 mL/min 的流速泵入柱中,转速设置为1800 rpm。达到流体动力学平衡后,将样品(4ml)注入进样阀。在254 nm、280 nm和330 nm波长下对流出液进行监测,并根据330 nm光吸收收集馏分(表1)。
表1 离心分配色谱(CPC)纯化条件
CPC 馏分分析
对CPC中收集的馏分进行HPLC分析,HPLC条件如表2所示。
表2 HPLC 分析条件
结果与讨论
CPC 进样
CPC溶剂体系确定后,分别在CPC 250-PLC 2050 系统上进行三次进样(分别为1g、3g 和2.85g 样品)。图4为第一次进样(1g)的色谱图。表3为三次进样合并收集馏分后的产量,馏分根据各自色谱图连翘脂苷A的峰图进行合并。从6.85 g合并的粗正丁醇馏分中,共得到连翘脂苷A 1.96 g,占总进样量的28.61%。
图4 连翘果实正丁醇馏分(1g进样量)的CPC色谱图。馏分11-16进行了合并,干燥和称重
表3 连翘脂苷A的产率
对CPC收集的馏分进行HPLC分析
图5显示了使用表2所述条件对第1批进样所收集馏分11-16进行HPLC分析。从图中可以看出,馏分11-16的纯度为94.56%。
图5 CPC第1次进样所得馏分11-16 的HPLC色谱图
结论与优势
参考文献:
1.Yang M., Xu X., Xie C., Huang J., Xie Z. and Yang D. Isolation and purification of forsythoside A and suspensaside A from Forsythia suspensa by high speed countercurrent chromatography. J.Liq.Chrom.Relat.Tech., 36, 2895-2904 (2013).
2. Ma T, Shi YL and Wang YL: Forsythiaside A protects against focal cerebral ischemic injury by mediating the activation of the Nrf2 and endoplasmic reticulum stress pathways. Mol. Med. Rep., 20, 1313-1320 (2019).
3. Hostettman K., Marston A., Hostettman M. Preparative Chromatography Techniques: Applications in Natural Product Isolation, Springer, Berlin, 1998.
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- 应用丨使用离心分配色谱法(CPC)从连翘中纯化连翘脂苷A
- 概论 \x26amp;nbsp;目的\x26amp;nbsp;连翘Forsythia suspensa (Thumb.) Vahl.,是
-
- 【ISCO 制备色谱仪】快速色谱法在简单碳水化合物纯化中的应用
- 使用 NextGen 300+ 配备蒸发光散射检测器和 RediSep Gold 胺柱,通过 HILIC 梯度方法可以高效纯化碳水化合物。梯度生成器使得 ISCO 制造的所有色谱柱都能快速开发和放大方法。
-
- 小贝开讲 | 离心原理与病毒分离纯化中的应用
- Webinar: "小贝开讲"之离心原理与病毒分离纯化中的应用
-
- Spinsights离心洞察第五期-纯化病毒载体时,应选择离心法还是亲和色谱法?
- 亲和色谱法(AC),亦称亲和层析法,因其工艺具备可扩展、高通量且支持自动化等优势,常应用于病毒载体纯化。
-
- 应用呈递丨使用 Clarity OTX 固相萃取 (SPE) 从组织中提取 2′-MOE 硫代磷酸酯
- 应用呈递丨使用 Clarity OTX 固相萃取 (SPE) 从组织中提取 2′-MOE 硫代磷酸酯
-
- 如何使用 EDGE 从食物中提取农药
- 请使用此方法及其建议使用 EDGE 从各种食物中提取杀虫剂。注意:此方法需要解决搅拌脚本程序。
-
- 【新品上市】告别离心烦恼,35分钟搞定质粒纯化!
- MagMAX Pro HT NoSpin 质粒小量制备试剂盒全新上市
-
- 文献|使用杆状病毒在细胞中表达和纯化小鼠CRISP4蛋白的三步纯化方案
- ?文献|使用杆状病毒在细胞中表达和纯化小鼠CRISP4蛋白的三步纯化方案
-
- 热点应用丨青叶胆片中獐芽菜苦苷的含量测定
- 青叶胆又叫肝炎草、小青鱼胆、七疸药,为龙胆科獐芽菜属植物的干燥全草。味苦,微寒,归肝胆经,具有清肝利胆、清热利湿的功效。用于黄疸尿赤,热淋涩痛。獐芽菜苦苷是青叶胆中的主要成分之一。
-
- 小贝离心课堂:人脑组织外囊泡纯化方法对比
- 小贝离心课堂:人脑组织外囊泡纯化方法对比
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
参与评论
登录后参与评论