蛋白提取 RIPA裂解液100ml 500ml

　　蛋白提取 RIPA裂解液100ml 500ml
 

　　规格：100ml 500ml

　　保存条件：-20℃

　　保质期：1年

　　产品名称：RIPA裂解液(强)

　　简介：

　　RIPA主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA裂解液(RIPA Lysis   Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。RIPA裂解液(强)(Enhanced  RIPA lysis buffer ,without   inhibitors)是采用一种经典的细胞组织快速裂解，并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(中)。

　　BUNSEN本生代理伊势久RIPA裂解液(强)的主要由NP-40、deoxycholate、SDS组成，含蛋白酶yzhi剂。由于含有较高浓度的去垢剂，因此不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

　　试剂准备：

　　RIPA裂解工作液：取适当量的裂解液，在使用数分钟内加入1%PMSF。

　　操作步骤(仅供参考)：

　　无需配制，直接使用。

　　(一)贴壁培养细胞

　　1、 取Enhanced RIPA lysis buffer室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。

　　2、 去除贴壁细胞的培养液，低速离心，弃上清。

　　3、 按照6孔板每孔加入150～250 ul含有PMSF的裂解液的比例，加入RIPA Lysis Buffer  。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解。通常裂解液作用于细胞1～3内，细胞就会被裂解。

　　4、 离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

　　5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

　　(二)悬浮培养细胞

　　1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。

　　2、 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

　　3、 用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250 ul裂解液的比例，加入Enhanced RIPA Lysis  Buffer。

　　4、 离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

　　5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

　　(三)组织样本

　　1、 取Enhanced Lysis Buffer置于室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。

　　2、 把组织剪切成细小的碎片，越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织，迅速 用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2  min之内，以减少蛋白的降解。

　　3、 按照每20 mg组织加入150～250 ul 裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。

　　4、 离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

　　5、 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

　　注意事项：

　　1、 去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。

　　2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

　　3、 如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/离心管，然后再裂解。

　　4、 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。

　　5、 溶解伊势久RIPA Lysis Buffer时，应尽量缩短溶解时间，避免有效成分失效。

　　6、 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。

　　7、 细胞裂解的操作步骤，应在低温环境下进行。

　　蛋白提取 RIPA裂解液100ml 500ml   本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。