化学发光反应前必须考虑的几个因素

化学发光测定法因其精湛的检测灵敏度而日益普及。常用的有鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯。在化学分析中使用化学发光反应检测分析物直接用化学发光化合物共价标记。触发化学发光标记进行发光反应会产生用于检测分析物的信号。这种方法的优点是更加简单明了，并且避免了使用较大的相对“粘性”标签的需求。然而是选择检测反应的因素，是酶标还是直接标、光强度怎么定等问题必须在设计反应之前考虑清楚。

酶标还是直接标？产生化学发光的常用方法是使用标记酶催化化学发光反应。每个标记可引发多个化学发光反应，因此通常仅需掺入一个或几个酶标记/分析物即可。化学发光化合物作为酶底物过量供应，以确保饱和动力学。光强度是标记酶量的线性函数。强度，即光子的发射速率/秒，是底物的催化转化与发光化合物寿命的乘积。

化学发光强度/时间分布图包括一个初始上升期，直至平稳期或假平稳期的延长发光。如果没有稳定的平稳值，则表明底物耗尽或酶失活。酶产生的化学发光的检测在测量过程中提供了极大的灵活性。穿过高点的任何时间点的光强度可能与酶的量有关。如果速度是单点还是多点斜率类型的测量问题，则可以在上升部分进行测量。为了获得高的灵敏度，但是，不存在许多合适的化学发光化合物。合适的候选物必须首先具有一定的功能，以允许与其他分子连接。更重要的是，标签一旦触发，应在尽可能短的时间内发出所有光线。

在一段时间内逐渐发出化学发光时，信号强度（光子/秒）降低，并且根据经验确定要检测的物种上化学发光标签的数量。即使理论上更多的标签应提供更多的光子，但如果标签间隔太近，则会发生猝灭效果。表面积和可衍生基团（通常为氨基或巯基）的数目提供了进一步的限制。在实践中，可以将10-20个标记结合到一个大分子上。此外，结合分子表面上的标记越多，标记越有可能干扰其结合特性。

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